微生物多样性的观察 - 副本.docVIP

微生物多样性的观察 - 副本 微生物实验报告 第一模块 微生物多样性的观察 作者：生命科学学院 09级4班 ** 【摘要】微生物在自然界是分布最广、种类最多的一类生物物种；无论在万米高空，还是在万米 深海，或是高原冻土，抑或极地冰芯，火山喷发地区、盐湖、热泉等都能寻找到它们的踪迹；可以这么说，微生物的生存环境涵盖了地球上的所有生境。为此，了解环境条件与微生物的关系对于理解微生物世界的多样性尤其重要。首次进入微生物学实验室，就需要建立“微生物无所不在”的基本意识，从而认识到无菌概念的重要性和环境卫生的必要性。由于微生物个体微小，肉眼难于辨别，必须借助光学显微镜才能观察清楚它们的基本形态。微生物的形态特征包括个体形态与群体形态，个体形态主要通过显微镜以及染色技术辨别其形态构造，而群体形态则是通过单个微生物细胞在固体培养基上经生长繁殖后所形成的菌落（子细胞集合）来认识，菌落形态特征包括大小、颜色、边缘、质地、表面形貌、湿润或干燥、光滑或皱褶、是否隆起，是否产生色素、同心圆等。群体形态也可以通过菌落转接固体斜面形成的菌苔来认识。 【关键词】微生物 细菌 染色 放线菌 真菌 噬菌体 【前言】 1 实验目的和意义 1．1 环境微生物采集与观察 1．1．1 了解环境与微生物的关系及其多样性； 1．1．2 学习环境微生物（土壤、水体、人体等）采样的基本方法； 1．1．3 初步掌握观察微生物的实验方法； 1．1．4 了解光学显微镜显微观察的基本操作和油镜头的使用方法； 1．1．5 了解并熟悉微生物的稀释涂布分离方法与技术； 1．1．6 树立严格的无菌意识和掌握正确的无菌操作方法。 1．2 不同微生物类群菌落的比较及细菌多样性观察与鉴定 1．2．1 学习观察细菌、放线菌以及霉菌的群体形态及培养特征； 1．2．2 了解革兰氏染色原理，掌握革兰氏染色技术； 1．2．3 熟悉细菌芽孢和荚膜的染色方法； 1．2．4 初步掌握平板菌落转接平板及固体斜面的菌种纯化方法; 1．2．5 初步学习平板菌落计数以及活菌检测的方法。 1．3 放线菌与真菌的显微形态特征观察以及酵母细胞的显微测微和直接计数 1．3．1 掌握观察放线菌和丝状真菌以及酵母菌显微结构的基本方法； 1．3．2 了解上述三类微生物的群落特征与细胞结构上的区别； 1．3．3 掌握测定微生物细胞大小的测微技术； 1．3．4 掌握对单细胞微生物进行显微直接计数的方法。 1．4 污水中大肠杆菌噬菌体的分离、纯化与观察 1．4．1 了解从环境污水中分离噬菌体的普通原理； 1．4．2 熟悉并掌握噬菌体的扩增、培养与检测的实验方法； 1．4．3 学习和掌握噬菌斑效价的测定方法。 2 主要内容 第 1 页 共 20 页 微生物实验报告 第一模块 2．1 环境微生物采集与观察 2．1．1 天然环境微生物样品的采集、分离、培养 2．1．2 口腔微生物的观察 2．2 不同微生物类群菌落的比较及细菌多样性观察与鉴定 2．2．1 细菌平板菌落的斜面转接 2．2．2 环境微生物分离结果的比较观察 2．2．3 细菌、放线菌与霉菌的平板菌落特征观察 2．2．4 放线菌与霉菌菌落的平板划线转接及盖片插片培养 2．2．5 细菌的染色技术 2．3 放线菌与真菌的显微形态特征观察以及酵母细胞的显微测微和直接计数 2．3．1 放线菌形态的显微观察 2．3．2 霉菌形态的显微观察 2．3．3 显微镜测微技术以及酵母细胞形态的观察 2．3．4 酵母细胞数量的显微计数 2．4 污水中大肠杆菌噬菌体的分离、纯化与观察 2．4．1 噬菌体的分离、扩增与验证 2．4．2 噬菌体的分离与验证 【实验材料与方法】 1 环境微生物采集与观察 1．1 实验内容与方法 1．1．1 天然环境微生物样品的采集、分离、培养 1．1．1．1 环境微生物样品采集 空气中微生物采集： 牛肉膏蛋白胨平板（单组）和马铃薯培养基（双组），打开皿盖在空气中暴露5min后盖上皿盖（室外和室内各一个）。 土壤微生物采集： 五点对角取样，混匀，称取1克土壤放入含9ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），振荡分散。 水体微生物采集与稀释：用灭菌三角瓶分别取污水和水库水约10ml。 1．1．1．2 样品稀释 土壤微生物样品的稀释：2克土壤放入含18ml无菌水的三角瓶中内含玻璃珠数粒），混匀后用加样枪和Tips在Epp管中进行10的倍比稀释成10-2,10-3,的梯度样品 水体微生物样品的稀释：将污水和洁净水, 分别稀释成10-1,10-2,10-3等系列。 1．1．1．3 样品的平板稀释涂布 微量