RP-HPLC测定脑得生片中4种皂苷含量.docVIP

RP-HPLC测定脑得生片中4种皂苷含量 　　摘 要：目的：建立同时测定脑得生片中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法，Apollo C18-A柱(5 μm，250mm×4.6mm)，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速1.0mL?min?-1，柱温30℃，检测波长为203nm。结果：三七中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1，4种成分在60min内可达到良好分离，在测定范围内线性良好，回收率在98%～102%之间。结论：所建立的含量测定方法简便可行，重复性好，可用于脑得生片的质量控制。 　　关键词：三七；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；人参皂苷Rb1；三七皂苷R1；RP-HPLC 　　中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)05-038-03 　　 　　脑得生片收载于《中国药典》2005年版(一部)，是由三七、红花、葛根、川芎、山楂5味药材制成的中药复方制剂，具有活血化淤、疏通经络、醒脑开窍等功效。临床用于脑动脉硬化、缺血性脑中风及脑出血后遗症等。三七为该方主药，含有多种三七皂苷及人参皂苷成分[1]，有关采用HPLC法测定三七药材及制剂中多种皂苷的方法已有报道[2，3]。本实验采用反相高效液相色谱法，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1，4种皂苷成分作为该制剂的同步定量测定指标，能更有效地控制制剂的质量。 　　 　　1 仪器与试药 　　 　　shimadzuLC-10Atvp型高效液相色谱仪，shimadzu SPD-10Avp型紫外检测器，N3000色谱工作站，AY120SHIMADZU分析天平；人参皂苷Rg1(110703-200322)、人参皂苷Rb1(110704-200318)、人参皂苷Re(110754-200319)和三七皂苷R1(110745-200312)对照品(中国药品生物制品检定所)，脑得生片样品(自制)，乙腈为色谱纯(CaledonLaboratoriesLTD.)，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。 　　 　　2 方法与结果 　　 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Apollo5u C18-A(250mm×4.6mm)；流动相：A(乙腈)-B(水)，梯度洗脱，0～15 min(19%A，81%B)，15～40min(19%A～25%A，81%B～75%B)，40～70min (25%A～50%A，75%B～50%B)；流速：1.0mL?min?-1；检测波长203nm；柱温30℃；进样量10μL。HPLC图见图1，三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1在上述色谱条件下与其他成分实现了基线分离。 　　2.2 对照品溶液的制??? 　　分别称取三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品各5 mg、10mg、5mg、10mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成含三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re分别为0.260mg?mL?-1、0.412 mg?mL?-1、0.420mg?mL?-1、0.204 mg?mL?-1的混合对照液。 　　2.3 三七药材对照液的制备 　　取三七粉末(过四号筛)0.6 g，精密称定，加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过取续滤液，即得。 　　2.4 供试品溶液及阴性对照液的制备 　　取本品20片，精密称定，研细，取约1g，精密称定，加入甲醇15mL，称定重量，置水浴上回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过取续滤液，即得。同法制得三七的阴性对照液。 　　2.5 方法学考察 　　①线性关系考察：分别精密吸取上述混合对照溶液2、4、6、12、16、20(μL)，分别注入高效液相色谱仪中，测定其峰面积，并以对进样量(X，μg)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标进行线性回归处理，回归方程分别为： 　　三七皂苷R1：Y=1.6220×10?5X+2.7527×10?3(r=0.9997)；人参皂苷Rg1：Y=1.9604×105X-2.8334×103(r=0.9999)；人参皂苷Re：Y=1.4266×10?5X+5.3408×10?3(r=0.9993)；人参皂苷Rb1：Y=1.5235×10?5X+1.6954×10?3(r=0.9999)。 　　结果表明，三七皂苷R1在0.520～5.20μg范围内具有良好的线性关系；人参皂苷Rg1在0.824～8.24μg范围内具有良好的线性关系；人参皂苷Re在0.408～4.08μ