卷枝毛霉菌T19不对称还原芬芳酮制备手性化合物的研究及其分析方法的建立.pdf

卷枝毛霉菌T19不对称还原芳香酮制备手性化合物的研究及 其分析方法的建立 摘要 手性化合物在医药、精细化工品、生命科学及材料科学等领域中占有极其重要的地 位，目前所用的药物相当大一部分是具有手性的，手性芳香醇作为合成手性药物的重要 中间体，在医药领域有着广泛的用途。生物催化反应条件温和，催化效率好，立体选择 性高，污染小，环境友好，可以完成一些化学法很难或不可能完成的反应。 本文采用微生物法不对称还原苯乙酮及其衍生物制各手性芳香醇，并利用高效液相 色谱法和气相色谱法建立了反应体系的定性及定量分析方法。主要研究内容和成果如 下： 1．利用气相色谱建立测定2．甲基苯乙酮与2．甲基．1．苯乙醇的分析方法，色谱分析条 件为：以FID为检测器；手性毛细管柱为色谱柱；进样温度为220℃；检测器温度为220 160℃。结果表明限)．2．甲基．1．苯乙醇、(S)．2．甲基。1．苯乙醇及2．甲基苯乙酮分别在 0．045。4．45 mg·mLl，0．0444．36mg·mL‘1和0．53--一10．52mg-mL以范围内线性关系良好， 率为100．6％-107．2％，结果表明此方法简单、准确、可靠。 用高效液相色谱建立4．甲基苯乙酮与4．甲基．1．苯乙醇的分析方法，色谱条件为：色 谱柱为Chiralcel nm，流 OJ-RH柱；流动相为V(乙腈)：V(水)：30：70，紫外检测波长220 速0．5mL·minl。 利用气相色谱建立了4．氯苯乙酮与4．氯．1．苯乙醇的分析方法，以FID为检测器：手 性毛细管柱为色谱柱；进样温度为220℃；检测器温度为220℃；柱温采用程序升温， 初始温度120℃，以5℃·minl升至165℃，保持2min，再以5℃·min‘1升至200℃。 2．以4_甲基苯乙酮为底物模型，从土样中分离纯化得到能不对称还原4．甲基苯乙酮 的微生物菌株13株。其中菌株T19具有较好的催化效率，能将4．甲基苯乙酮高效不对称 还原为s4．甲基．1．苯乙醇。该菌经过16S rDNA进行分子生物学鉴定，被鉴定为卷枝毛霉 T19。 菌(Mucorcircinelloides)，将其命名为Mucorcircinelloides 3．考察了Mucorcircinelloides T19不对称还原4一甲基苯乙酮制备(s)．4．甲基一1一苯乙 醇的反应，并进一步研究其最优反应条件。结果表明，在反应体系的初始pH为7，30℃， 添加50 g-L。葡萄糖为辅助底物，底物4．甲基苯乙酮的加入量为3g．L一，反应3d后，底物 4．甲基苯乙酮的转化率高达至1J98．9％，e．e．值达到100％。 circinelloidesT19还可以不对称还原苯乙酮、苯丙酮、2·甲基苯 4．研究发现，Mucor 乙酮、4．氯苯乙酮和4．氟苯乙酮等一系列芳香酮为相应的(S)一构型的芳香醇，且具有较高 circinelloidesT19菌体细胞对不同结构的芳香 的转化率和立体选择性。同时发现，Mucor 酮底物的催化效率及立体选择性都存在差异。 5．在T19发酵液反应体系中，添加苯乙酮的同时再分别添N4。甲基苯乙酮、2．甲基 苯乙酮、4．氯苯乙酮、4．氟苯乙酮组成二元反应底物，考察了苯乙酮与这些芳香酮在菌 株T19催化作用下的反应竞争性。 4一甲基苯乙酮具有较明显 (1)在苯乙酮与4一甲基苯乙酮共存的二元底物体系中， 的反应优势，4一甲基苯乙酮的转化速率(61．1％84．4％)均大于苯乙酮的转化率(39．5％～ 81．5％)。在竞争反应体系中4一甲基苯乙酮还原产物的ee值(too％)大于苯乙酮还原产物的 ee值(86％左右)。 (2)在苯乙酮与2一甲基苯乙酮共存的二元底物体系中，菌株T19催化苯乙酮的转化 率(77．2％)高于2一甲基苯乙