二丁酰环磷腺苷钙中有机残留溶剂气相色谱法测定.docVIP

二丁酰环磷腺苷钙中有机残留溶剂气相色谱法测定 　　摘 要 目的：建立二丁酰环磷腺苷钙中有机溶剂乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶的分离测定方法。方法：采用DB-1701毛细管色谱柱，程序升温，采用FID检测器，溶液直接进样气相色谱法，载气为氮气。结果：乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶完全分离，其浓度分别在2.2～240.6μg/ml、14.3～238.1ug/ml、2.0～9.8μg/ml、6.0～28.8μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9998、0.9998、0.9991、0.9994；最小检测浓度分别为0.6μg/ml、4.7μg/ml、1.9μg/ml、0.6μg/ml；回收率分别为100.2%、102.9%、103.9%、103.2%。结论：本试验建立的方法简便灵敏，结果准确可靠，适用于二丁酰环磷腺苷钙中的有机残留溶剂的检测。 　　关键词 二丁酰环磷腺苷钙 蛋白激酶激活剂 气相色谱法 有机溶剂残留 　　 　　二丁酰环磷腺苷钙为化学合成的环磷腺苷衍生物，属蛋白酶激活剂，对细胞的渗透性比环磷腺苷强，可催化人体内一氧化磷酸反应和三羧酸循环，对抗体内磷酸二酯酶的降解作用，激活人体各种反应。同时产生大量ATP（三磷酸腺苷），改善细胞能量代谢，促进神经再生，扩张血管，舒张平滑肌，改善心肌缺氧缺血等作用［1］。本文针对原料制备工艺中使用到的乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶四种有机溶剂采用气相色谱法［2］，在同一色谱系统中同时测定该四种有机残留溶剂。该方法快速、灵敏，结果准确、可靠。 　　 　　仪器与试药 　　Agilent 6890气相色谱仪（安捷伦公司）；FID检测器；G 2913A自动进样器；Agilent A.10.02色谱工作站。 　　二丁酰环磷腺苷钙原料药（紫源制药有限公司）；乙醇、乙醚、二氯甲烷、吡啶均为市售分析纯试剂。N,N-二甲基甲酰胺为Tedia色谱级试剂。 　　 　　试验方法与结果 　　色谱条件:色谱柱：DB-1701毛细管柱（30mm×0.32mm，涂层厚1μm）。柱温：采用程序升温，初始55℃保持1分钟以后，以5℃/分升温至110℃，保持1分钟，以40℃/分升温至250℃，保持5分钟。FID检测器，温度300℃。分流进样，分流比15∶1，进样量1μl。进样器温度180℃。载气为氮气，流速2.5ml/分。 　　溶液的制备：分别精密称取乙醚、乙醇各0.2g，置100ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺??释至刻度，摇匀，作为乙醚、乙醇贮备液。精密称取二氯甲烷0.48g、吡啶0.16g，置100ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置20ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为二氯甲烷、吡啶贮备液。精密量取乙醚、乙醇贮备液和二氯甲烷、吡啶贮备液各5ml置50ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得乙醚、乙醇的浓度为0.20 mg/ml，二氯甲烷浓度为0.024mg/ml，吡啶浓度为0.008mg/ml的混合标准溶液。取本品约0.2g，精密称定，置5ml容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，振摇使溶解，即得供试品溶液。供试品浓度为40.00mg/ml。 　　测定方法：精密量取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；另取标准溶液同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 　　系统适用性试验：在上述色谱条件下，将标准溶液与供试品溶液分别进样，各组分均完成分离，分离度分别为2.2、4.4、36.4，乙醇理论塔板数为6586，乙醚为47685，二氯甲烷为23372，吡啶为29979。色谱图见图1。 　　线性关系：配制各溶剂梯度浓度的溶液，以测得每个浓度点的平均峰面积Y为纵坐标，以相对含量X为横坐标进行线性回归，计算回归方程及相应的线性回归系数。结果表明在各溶剂测定浓度范围内，浓度与其峰面积线性关系良好。见表1。 　　图1 乙醚、乙醇、二氯甲烷和吡啶标准溶液在气相色谱中的分离，1为乙醚；2为乙醇；3为二氯甲烷；4为吡啶。 　　 　　检测限：分别配制各组分最小检测限浓度溶液，计算吡啶、乙醚、乙醇和二氯甲烷的峰高与噪声的比值（信噪比），其信噪比（S/N）在3±1的浓度为最小检测限浓度。吡啶的最小检测浓度是0.6μg/ml。乙醚的最小检测浓度是0.6μg/ml。乙醇的最小检测浓度是4.7μg/ml。二氯甲烷的最小检测浓度是1.9μg/ml。 　　定量限：分别配制各组分定量限浓度溶液，计算吡啶、乙醚、乙醇和二氯甲烷的峰高与噪声的比值（信噪比），其信噪比（S/N）在10±1的浓度为定量限浓度。吡啶的定量限浓度是2.06μg/ml。乙醚的定量限浓度是2.24μg/ml。乙醇的定量限浓度是14.54μg/ml。二氯甲烷的定量限浓