促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化研究.docVIP

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化研究 　　【摘要】 目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法 通过梯度分离获得成年大鼠MSCs ,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE) 、神经丝蛋白(NF) 、胶质纤维酸性蛋白( GFAP) 和神经巢蛋白(Nestin) 的表达情况，流式细胞仪检测分析诱导率。结果 BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）所获得的神经元样细胞诱导率高(49． 7%)。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。? 　　【关键词】 骨髓;间充质干细胞;诱导分化;神经元样细胞?? 　　 　　To facilitate the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into neuronlike cells ZHU Fu-liang,JING Cheng-wei.Department of Orthopaedics, the 2nd Hospital of Tianjin Medical University,Tianjin 300211,China ? 　　【Abstract】 Objective To explore the means of transdifferentiation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSC) of adult rat to neuronlike cells in vitro. Methods BMSCs which were isolated from adult rats using gradient cent rifugation and subculture differentiation were induced into neuronlike cells by cytokine and oxidane. Immunocytochemistry analysis a examination was performed.about neuron specific enolase(NSE)、neurofilament protein (NF) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) and flowing cytometry analysis examination was perfpomed inductivity. Results The BMSC could be transdifferentiated to neuronlike cells with the expression of Nestin. The inducible rate of BMSC with basic fibroblast growth factor (bFGF)、butylated hydroxyarisol(BHA) was 49．8% .Conclusion bFGF、BHA can facilitate the process of BMSC being differentiated into Neural precursor cells.? 　　【Key words】 Bone marrow; Mesenchymal stem cells; Induction differentiation; Neuronlike cells 　　 　　探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs) 的体外分离、纯化、扩增、传代培养及定向诱导分化为神经元样细胞的更好方法,为BMSCs 在神经系统疾病的临床应用提供理论依据和技术方法。? 　　1 材料与方法? 　　1．1 材料和试剂 成年Wistar 大鼠,体质量120 g 左右。Percoll 分离液(美国Pharmacia 公司) , 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF ,R D 公司) ,β2巯基乙醇(β2ME) 、硫代甘油、叔丁基对羟基茴香醚(BHA) 、二甲基亚砜(DMSO , Sigma 公司) , 兔抗大鼠神经元烯醇化酶(NSE Maxim 公司)多克隆抗体、兔抗大鼠神经丝蛋白(NF2 Maxim公司) 多克隆抗体和胶质纤维酸性蛋白( GFAP Maxim公司) 多克隆抗体及兔抗大鼠神经巢蛋白(Nestin , Pharmingen 公司)多克隆抗体。 ? 　　1．2 原代及