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停训恢复后大鼠海马VEGF免疫组化表达差异研究 　　摘要：目的 以不同强度训练大鼠停训28周为对象，应用免疫组织化学技术探讨长期停训对大鼠脑组织的影响。方法 雄性SD大鼠（3月龄，由西安交通大学医学院动物管理中心提供）24只，体重248±24g，国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，温度22℃?27℃，湿度40％?60％。适应性喂养1周后进行实验。将大鼠随机分为安静对照组、有氧训练组和疲劳训练组，每组各8只。有氧训练组和疲劳训练组运动负荷参照Bedford跑台训练模型训练8周。8周后疲劳训练组和有氧训练组停训，与对照组同处于正常笼内生活状态，再饲养28周。各组大鼠依次用乌拉坦腹腔麻醉，开胸行左心室穿刺灌注，同时剪破右心耳放血。灌注过程中，先用加3‰肝素生理盐水灌注15 min左右，直至流出液体为粉红色时换用中性甲醛固定液灌注40min左右，pH=7.4，将灌注好的标本置于事先准备的冰盘上并迅速取材。结论: 大鼠恢复28周后有氧、疲劳训练使海马CA1区的表达增强，未见显著性差异。显示该区在训练恢复后VEGF阳性表达基本恢复。海马CA3区， VEGF的表达下降趋势显著。 　　关键词：免疫组织化学；血管内皮生长因子(VEGF)；细胞凋亡；运动训练 　　中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1007-3612(2007)10-1370-03 　　 　　血管内皮生长因子（Vascular endothelial Growth factor, VEGF ）是Ferrara等［1］在牛垂体星形胶质细胞体外培养液中首先纯化出并加以命名的。经测序和基因分析发现，与血管通透因子（Vascular Permeability factor,VPF）为同一基因家族。VEGF能通过其受体特异性作用于血管内皮细胞，强烈促进其增殖，促进血管形成，并有升高血管通透性的作用。因此，VEGF及其受体在心血管疾病、肿瘤和创伤修复等方面的应用引人注目。VEGFB和VEGFC是近来发现的血管内皮生长因子家族的两个新成员, VEGFB有两种存在形式,即VEGFB167和VEGFB168,主要表达于胚胎及成人的肌肉组织(心肌及平滑肌),可通过与VEGFRB 1/FLT 1结合发挥促血管生成的作用。VEGFC主要表达于胚胎中富含淋巴管的区域及成人的心脏、胎盘、卵巢、小肠和甲状腺等组织，能通过与VEGFR2及VEGFR3/FLT 4结合,发挥促血管、淋巴管形成及维持淋巴内皮细胞功能???作用。二者的发现使VEGF家族的成员进一步扩大并说明了内皮细胞功能调节的复杂性。 　　VEGF作为多肽神经生长因子，可能与神经的营养和再生，血管再生，创伤愈合等多项功能有关。VEGF能保护神经元对抗缺氧、低血糖、兴奋性氨基酸、钙超载、自由基和一氧化氮等多种损伤，可以防治和减少继发性脑损伤，提高颅脑损伤的救治效果。VEGF与其受体有极高的亲和力，会引起胞浆内Ca2+浓度短暂性升高，刺激三磷酸肌醇（IP3）聚积，通过磷酸肌酸特异性的磷脂酶C完成自身磷酸化，促进内皮细胞的分裂，迁移和增殖［2-4］。本研究采取免疫组织化学的方法，观察大鼠停训后VEGF的表达变化，探讨不同组大鼠停训后VEGF的意义及其作用机制。 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1实验对象及运动模型雄性SD大鼠（3月龄，由西安交通大学医学院动物管理中心提供）24只，体重(248±24)g，国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，温度22～27℃，湿度40％～60％。适应性喂养1周后进行实验。将大鼠随机分为安静对照组、有氧训练组和疲劳训练组，每组各8只。采用递增强度方式进行跑台运动，运动负荷参照Bedford跑台训练方法。对照组：正常笼内生活状态，不进行运动训练。有氧训练组、疲劳组适应性训练3 d，起始训练速度15 m/min，时间为15 min。有氧训练组：训练5 d/周，共8周。递增速度为3 m/min、时间5 min，运动至速度为20 m/min、时间为60 min后增加跑台坡度为5°。疲劳训练组：训练6天/周，共8周。递增速度为3 m/min、时间5 min，运动至速度为20 m/min时，增加跑台坡度为5°，运动至速度为35 m/min，运动时间为60±10 min后增加跑台坡度为10°。8周后疲劳训练组和有氧训练组停训，与对照组同处于正常笼内生活状态，再饲养28周。 　　1.2免疫组织化学取材及观察各组大鼠，称重后依次用乌拉坦腹腔麻醉，开胸行左心室穿刺灌注，同时剪破右心耳放血。灌注过程中，先用加3‰肝素生理盐水灌注15 min左右，直至流出液体为粉红色时换用中性甲醛固定液灌注40 min左右，pH=7.4，将灌注好的标本置于事先准备的冰盘上并迅速取材:中性甲醛固定，常规脱水，二甲苯透