有氧运动抗ApoE--小鼠动脉粥样硬化L-精氨酸机制探讨.docVIP

有氧运动抗ApoE--小鼠动脉粥样硬化L-精氨酸机制探讨 　　摘要：目的：以ApoE基因缺陷小鼠为动脉粥样硬化模型，观察有氧运动对小鼠动脉粥样硬化斑块的作用，及运动对血浆一氧化氮（nitric oxide，NO）、血浆L-精氨酸（L-arginine, L-Arg）与不对称二甲基精氨酸（asymmetric dimethlarginine，ADMA）比值的影响，以探讨NO及其底物L-Arg在运动抗动脉粥样硬化中的作用。方法：ApoE基因缺陷小鼠随机分为安静对照组和运动组（游泳运动，2 h/次，5次/周，共10周），分别测定粥样斑块面积，采用硝酸还原酶法测定血浆中NO水平，利用高效液相法测定血清中ADMA与L-Arg的水平，另对血清肌酐和肾脏超微结构进行观察。结果：与对照组相比，运动组小鼠斑块面积显著减小40%（P 　　关键词：有氧运动；动脉粥样硬化；ADMA；L-Arg 　　中图分类号：G804.2文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)03-0336-03 　　 　　大量流行病学资料表明，有氧运动是防治动脉粥样硬化及其并发症的有效措施。运动可通过调节脂代谢、提高机体抗氧化能力等机制减轻动脉粥样硬化损伤。自1987年气体小分子一氧化氮（nitric oxide, NO）被发现后，立即成为动脉粥样硬化发病机制研究的新靶点。大量研究表明一氧化氮除了促进血管舒张之外，还具有抗氧化、阻止血小板聚集和单核细胞粘附、抑制平滑肌细胞增值等多种作用，是一种公认的抗动脉粥样硬化因子，动脉粥样硬化时NO系统功能紊乱已成为动脉硬化的发病机制之一。 　　L－精氨酸（L-Arginine，L-Arg）是合成NO的底物，在一氧化氮合酶的作用下，生成一氧化氮和L－瓜氨酸。当机体L-精氨酸利用遇到障碍时，一氧化氮合成减少，是动脉粥样硬化时NO系统功能紊乱的重要原因。近期研究表明动脉粥样硬化时存在L-Arg的相对不足，即L-Arg的含量并没有显著性变化，但L-Arg的利用确显著降低。目前研究提示L-Arg进入细胞被进一步利用是通过L-Arg转运体来实现的，其转运速率并不仅依赖于L-Arg的浓度，还受多种因素调节，如切应力等。此外L-Arg与一氧化氮合酶的亲和力的变化也是影响L-Arg利用的原因。近年来一氧化氮合酶内源性抑制剂的发现为L-Arg利用障碍的研究提供了新的途径。 　　内源性一氧化氮合酶抑制剂为L-精氨酸???同系物，包括单甲基精氨酸（L-NMMA）和二甲基精氨酸（包括ADMA和SDMA，SDMA不具有活性），其中研究较多的是不对称二甲基精氨酸（asymmetric dimethlarginine，ADMA），其与L-精氨酸竞争性的抑制一氧化氮合酶活性，减少NO的生成，现认为ADMA升高是动脉硬化新的危险因子。 　　本工作以ApoE基因缺陷小鼠为动脉粥样硬化模型，观察有氧运动对小鼠动脉粥样硬化斑块的作用，及运动对血浆NO、血浆L-Arg与ADMA比值的影响，以探讨NO及其底物L-Arg在运动抗动脉粥样硬化中的作用。 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1材料8周龄ApoE基因缺陷小鼠由北京大学医学部实验动物中心提供，恒定室温下饲养，每12 h昼夜交替光照，饲以“西方膳食”饲料（胆固醇0.15%，脂肪21%），自由饮水。一氧化氮测定试剂盒由南京聚力生物医学工程研究所提供，ADMA及L-Arg标准品均购自Sigma公司。其余为市售分析纯产品。 　　1.2运动模型的制备及分组取相同8周龄大鼠实验共有两组（n＝6）：1) ApoE基因缺陷对照组：不运动的ApoE基因缺陷小鼠；2) ApoE基因缺陷运动训练组：进行无负重游泳运动，游泳槽深60 cm，水温保持在(31±1)℃。游泳运动共持续11周，每周5次，每次120 min，每次游泳都在同一时间进行（15:00-17:00），有氧运动时间参照李晖等报道。游泳训练的第一周为适应性训练，由最初的15 min直至120 min，每天递加。全部动物于ApoE基因缺陷末次运动后24 h，摘眼球取血；取左侧肾脏，预固定；迅速打开胸腔，连同心脏及主动脉取出，固定于蜡块平皿，解剖镜下去除结缔组织，液氮保存，用于下述测定。 　　1.3油红O染色测定斑块面积根据Paigen B等方法进行。以两心房尖为点所连成的直线部位，去除以下心室，然后装台，OCT包埋后，进行冰冻切片。切片厚度为8 μm，从主动脉瓣即将消失的部位开始向升主动脉方向取片，每隔一张取片，所取得的切片，进行油红O染色及HE复染后，每隔5张取一张参与评估，共取5张，利用计算机模拟图象分析（CMIAS-998型图象分析系统）对油红O染色部位进行面积估算。 　　1.4高效液相法测定血浆L-Arg和ADMA水平根据文献介绍的方法［