研究生 中药药理学 课件 6.3常用药效筛选试验2.ppt

抑制自由基作用的实验 自由基损伤细胞的体外模型 自由基测定：血清中过氧化脂质、组织中过氧化脂质、脂褐素、羟自由基、过氧化氢、超氧化物岐化酶 氧化应激相关基因NF-ΚB（核转录因子）的检测 当细胞受到自由基作用，在氧化应激状态下， NF-ΚB向核内移动，与核内基因序列上的特异性调控区结合，激活受调控的基因表达。 清除自由基： 实验指标:SOD 、MDA 、LPO 、MAO 脂褐素 H2O2 过氧化脂质。自由基使脂质发生过氧化作用而形成，使生物体内细胞膜发生过氧化反应受到损伤，引起疾病和老化。 丙二醛，脂质过氧化反应产物 衰老的标志，MDA与含游离氨基的物质如蛋白质、核酸交联生成。 抗皮肤衰老作用的实验方法 1.体外细胞培养实验 皮肤组织的细胞培养 2. 紫外线损伤皮肤模型的建立（整体实验） 对紫外线照射损伤的保护作用。 3. 其他：细胞的胶原合成定量测定、细胞色素抑制作用、药物对紫外线损伤皮肤细胞DNA短片化的检测、表皮细胞Telomer DNA的分析 端粒 老年痴呆 阿尔茨海默病：该病是最常见的痴呆症 病因学 遗传因素 微量元素 免疫反应 产生异常蛋白 慢性病毒感染 脑血流的改变 致病因素 Tau 蛋白 β -淀粉样前体蛋白 (βAPP) 通路 a. β -淀粉样前体蛋白 b. α, β, γ-分泌酶 c. 早老素 载脂蛋白 E (APOE) β -淀粉样前体蛋白 出现异常时，β-淀粉样前体蛋白的42aa片段颗粒能堆积在神经元间隙中，形成Alzheimer 病特异性的斑块 斑块可引起 中断 Ca++ 信号传递（意味细胞死亡 ？） 释放自由基，损害线粒体 激活免疫细胞，产生炎性反应，加重损害 治疗药物分类 神经递质前体药；神经递质合成促进剂；神经递质分解酶抑制剂；乙酰胆碱受体激动剂；脑细胞代谢激活剂；脑循环改善剂；钙拮抗剂；肽类激素；神经营养因子；雌激素；抗氧化剂；非甾体抗炎药；抗Aβ(β淀粉样蛋白)药；中药 神经细胞的分离培养 大脑皮层神经细胞的分离培养 星形胶质细胞的分离培养 雪旺细胞的分离培养（促进轴突再生、促进再生轴突的髓鞘化 ） 实验药物对神经细胞作用的观察 1、活体观察：贴壁、生长晕、细胞迁移、细胞聚集、神经突起网络 2、组织学观察 3、电子显微镜观察：超微结构 4、免疫荧光法观察技术 哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞。呈星形，从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用 神经再生过程可分为三个阶段：轴突芽生；再生轴突的生长、延伸；恢复神经支配原靶器官 神经细胞的损伤体外模型建立 活性氧物质对神经细胞损伤的模型（H2O2） 缺血缺氧对神经细胞损伤模型的建立（体外，在培养细胞中加缺氧溶液） 其他模型： 咖啡因损伤模型 NO神经毒性损伤模型 NMDA （N-甲基-D-天冬氨酸）神经毒性损伤模型 谷氨酸神经毒性损伤模型 抑制神经细胞损伤的药效学作用观察 1、药物作用于细胞的形态观察 2、实验细胞的生物化学测定 MTT法活细胞测定 LDH和K+流出测定法测定细胞损伤程度 MDA测定法 Ca2+测定法（钙超载） 细胞凋亡率检测 3、PC12细胞对神经营养性活性物质的体外观察 4、试验药物对神经损伤模型的作用 老年痴呆体内动物模型的建立 基底大细胞核损伤模型：脑室注入胆碱能神经毒性物质 胆碱能神经元所致自身免疫性痴呆模型：白喉毒素结合的NGF（神经生长因子）致前脑胆碱能神经元损伤。 β-淀粉样蛋白和转基因动物模型 老龄动物模型 铝诱导痴呆模型 微量元素学说 铝盐可引起动物神经元产生类似该病中的神经纤维缠结退行性变。在该病患者大脑中的铝含量比正常人高出10至 30 倍即便通过饮水，也可导致铝盐的蓄积，从而致病。 痴呆病人多有胆碱能神经功能降低表现 。治疗可增加脑内胆碱和卵磷脂以诱导乙酰胆碱的合成；或用胆碱酯酶抑制剂。 寿命实验法 1、果蝇寿命延长实验法（随机分组） 2、家蚕寿命延长实验 观察指标：对寿命的观察（蚁蚕到结茧、茧子到出蛾、出蛾到产卵蛾死亡、总寿命） 体重和生长（2天1次）、蚕茧的