第十章　动物实验技术2011.ppt

例1：实验采用市售健康成年家兔30只、雌雄兼用、雌者不孕…… 例2：实验动物使用BALB/c小鼠，清洁级动物，实验动物合格证号:1009143 ，由河北医科大学实验动物学部提供，共30只，雌雄各半，体重16－18g，实验动物在屏障环境中饲养。相关环境指标按照国家《实验动物环境及设施》标准(GB 14925-2001) 执行,实验动物使用许可证号:SYXK(冀) 2008-1-003。饲料生产许可证号: SCXK(冀) 2008-2-001。 动物实验的整个过程： 1. 动物实验前的准备 2. 实验动物的编号和分组 3. 试验处理 4. 数据记录 5. 实验条件的维持 动物的处理 整理数据结束试验 急性毒性试验 一、动物实验前的准备:环境准备，饲料准备，实验设计，购买动物。常用KM小鼠，体重18～22g，雌雄各半。 二、动物实验： 1、实验动物的编号和分组：设计所用药物的不同剂量，最低剂量人用剂量的100倍，分为多组。分别编号随机分组。 2、试验处理：尾静脉注射或腹腔注射一定剂量药液，观察有无不良反应(如惊厥、四肢瘫痪、步伐不稳、竖毛、呼吸抑制等)或死亡现象，一般观察24～48小时。 3、数据记录：记录实验过程中动物的情况及死亡情况。 4、实验条件的维持 ：维持动物实验所需的温度、相对湿度、换气次数、噪声、光照度和洁净度。适时更换垫料、充足的食水、全价营养饲料和健全的洗刷消毒制度。 5、动物的处理：试验完成后处理未死亡动物，将尸体集中焚毁。 三、整理数据结束试验：整理实验数据，得出结论，写出论文或报告。 动物实验技术录像—— 第十节 现代实验动物学技术 一、试管动物培育技术 试管动物（test tube animal）是指经体外受精获得早期胚胎并移植到假孕动物子宫发育而产生的动物。试管动物培育除本身的发育生物学研究意义外，还具有克服动物生殖缺陷、提高动物繁殖力、定向培育动物新品种（系）等重要意义。试管动物培育技术涉及到超数排卵、体外受精、胚胎培养与移植等技术。 1. 试管动物培育程序: 试管动物培育程序如图. 精子采集 超数排卵 假孕动物准备 精子获能 卵子采集 体外受精 胚胎移植 胚胎培养 产仔 二、转基因动物培育技术 培育转基因动物的关键技术包括：外源目的基因的制备、外源目的基因的有效导入、胚胎培养与移植、外源目的基因表达的检测等。 （1）目的基因的制备与纯化：目的基因可以来源于，①通过限制性内切酶预先分离的某一基因；②逆转录法得到的cDNA；③人工合成的DNA片段；④聚合酶链式反应（PCR）扩增的特定基因片段。 （2）卵供体母鼠和假孕鼠的准备。? （3）超排卵与取卵。 （4）基因显微注射。 （5）受精卵移植。 （6）目的基因的表达整合鉴定和检测。 （7）建系。 显微注射法制备转基因小鼠的程序 另外,现在还有用逆转录病毒,腺病毒,禽痘病毒作为载体感染动物复制转基因动物模型. 三、克隆动物培育技术 1.核移植法克隆动物:细胞核移植又包括胚胎细胞核移植、体细胞核移植、干细胞核移植等。 2. 胚胎分割法克隆动物:将尚未着床的早期胚胎经显微手术后，分割为二、四、六若干等份，给每个受体内植入一部分胚而妊娠产仔，这样由一个胚胎可以克隆出多个遗传性能完全一样的后代个体。 2. 经口给药法 （1）口服法：把药物放入饲料或溶于饮水中让动物自动摄取。此法优点在于简单方便，缺点是不能保证剂量准确。一般适用于对动物疾病的防治或某些药物的毒性实验，制造某些与食物有关的人类疾病动物模型。 （2）灌胃法：在急性实验中，多采用灌胃法。此法剂量准确。灌胃法是用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内。灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成或直接采用灌胃管。小鼠的灌胃针长约4～5cm，直径为1mm；大鼠的灌胃针长6～8cm，直径约1.2mm。灌胃针的尖端焊有一小圆金属球，金属球为中空的。焊金属球的目的是防止针头刺入气管或损伤消化道。针头金属球端弯曲成20°左右的角度，以适应口腔、食道的生理弯曲度走向，见图10-17。 鼠类的灌胃法：用左手固定鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口腔与食道成一直线，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力，此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。一般灌胃针插入小鼠食道深度为3～4cm，大鼠或豚鼠为4～6cm。常用灌胃量小鼠为0.2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠1～5ml。注