乙肝病毒的异质性与临床意义.ppt

乙型肝炎病毒的异质性 及临床意义 成 军 博士、教授 解放军第三零二医院 解放军传染病研究所 基因治疗研究中心 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 科 研 主 要 方 向病毒性肝炎发病的分子生物学机制（肝炎病毒-肝细胞之间相互作用的分子生物学机制） 肝炎病毒的特异性受体 HBV DNA的整合及其后果 肝炎病毒蛋白结合的肝细胞蛋白 HBV DNA/HCV RNA-结合蛋白 肝炎病毒反式激活的肝细胞的基因 科 研 主 要 技 术 抑制性消减杂交技术 噬菌体表面展示技术 酵母双杂交技术 酵母单杂交技术 基因芯片技术 基因工程抗体技术 基因疫苗技术 病毒载体技术 转基因动物技术 细菌发酵和蛋白质纯化技术 Quasispecies of Hepatitis Virus 第一部分乙型肝炎病毒的血清型 1 决定因素乙型肝炎病毒的血清型，由膜主蛋白序列来决定。2 亲水结构区HBsAg有两个亲水区：32-76 aa和110-156 aa。HBsAg亲水赖氨酸改变，抗原活性消失。3 共同决定簇139-147 aa是共同簇抗原a必需的最小序列。 1 排斥决定簇主蛋白还携带两对相互排斥的亚型决定簇d/y （122-134 aa指令d/y决定簇）和w/r （159-160 aa指令w/r决定簇）。2 四个主要亚型组成4个主要亚型：adw、adr、ayw和ayr。 根据w分型可将其再分为w1-4。 HBsAg的101-180 aa与HBV的S基因的d/y、w/r、w1- w4和q相对应。第127氨基酸残基为脯氨酸、苏氨酸和亮氨酸是分别代表w1/w2、w3 和w4。在ayw1 和ayw2有5个氨基酸残基有差异. 分别是第134残基（苯丙氨酸代替酪氨酸），第143残基（苏氨酸代替丝氨酸），第159残基（丙氨酸代替甘氨酸）和第168（缬氨酸代替丙氨酸）. ayw有ayw1、ayw2、ayw3和ayw4，adw又有adw2和adw4； r也可再分为r、rq+和rq-，就出现了ayr、adrq+和adrq-。adw4q- 和adrq-与所有的q+亚型在2个区域有差异，即158和159残基、177和178残基，在q-亚型毗连位置都有氨基酸替代。 除了4个主要亚型外，还有adyr、adwr、adyw/aywr和adywr等复合亚型。不同亚型在外膜蛋白的前-S区序列和全基因组序列亦有相应的差异。 ayw：地中海沿岸、非洲、中近东、俄罗斯、印度；adr：起于我国北部，由朝鲜、日本向南；adw：由我国南部、南印度、印尼、菲律宾，跨越太平洋至南非、北美等地。 西藏的HBV基因型为C，并且至少存在两个亚型。占优势的是C/D混合型，血清型为ayw2，另一种为基因型C，血清型为adw。台湾大部分HBV血清型adw的基因型为B，所有血清型adr的基因型为C。生于大陆的患者感染血清型adr/基因型C的比例较高。 HBV感染后常引起感染的慢性化，引起慢性肝炎，肝硬化。许多肝细胞癌患者也常常伴有HBV感染。不同的HBV亚型及亚型内特异部位的核苷酸位点的变异可能与感染的慢性化及感染后病情的转归有一定的关系。 第二部分乙型肝炎病毒的基因型 HBV基因型的定义 分型方法是根据HBsAg主蛋白基因或全基因组核苷酸序列差异性进行的基因型分型，差异大于8%即被确定为另一基因型，按照这种分型方法，将HBV分为6种基因型，分别命名为A-F型，另有学者新定义了G、H型，尚待确定。 国内流行病学资料 国内主要的基因型为B、C两型，台湾省的研究资料提示除E型外，其他基因型均可在华人HBV感染者中检出，B和C型占患者人群的85%。 本实验的检测方法 文献：J Clin Microbiol 2001；39：362-364. HBV基因型检测方法 提取血清中HBV DNA 18 小时 外引物第一次扩增 4 小时 内引物第二次扩增 2 小时 电泳 1 小时 必要时重复 HBV基因型分型结果 HBV基因型的临床意义 有研究认为基因型与病情的进展有关，C型与进展性肝病密切相关，台湾学者的研究结果认为肝硬化患者中的C基因型较为多见，C型与50岁以上HCC有关，B型与50岁以下的HCC有关。 有研究认为基因型与干扰素治疗的效果有关。 最新研究认为基因型与拉米夫定治疗的效果有关。 HBV基因