Luminol-Hlt;,2gt;Olt;,2gt;-HRP-BPB增强化学发光新体系的研究及其在磁酶免疫分析中的运用.pdfVIP

及其在磁酶免疫分析中的应用 摘要 化学发光分析法由于仪器设备简单，分析速度快，灵敏度高，线性范围宽等 优点，越来越受到科研工作者的广泛关注。本工作研究了新型增强剂溴酚兰(BPB) 化学发光新体系。在最佳实验条件下，分别测定了游离HRP和HRP标记物的线 性范圈及检测限。将此化学发光增强体系与磁性分离技术和酶联免疫分析相结 合，对癌胚抗原(CEA)、甲状腺素(瓢)等肿瘤标记物进行了测定。此终，采用 纳米会作为酶标抗体标记物，利用化学发光增强体系对甲胎蛋白(AFP)进行检 测。结果表明，该方法灵敏度高，分析快速、简便，在生物分析中具有广阔的应 用前景。 本文主要开展了以下几个方面的工作： 一、Lumin01．H202．HRP-BPB增强化学发光新体系的研究 实验条件下，对游离HRP进行了测定，测定游离HRP的线性范围为l。0×1001～ 5．0×10以u g／mL，检测限为1．25×10。2g／mL；并对HRP标记物进行了测定，检测 显色法低l 探讨。 采用羧基修饰的磁性微球，经EDC／NHS活化处理后得到活化磁性微球，将 AFP单克隆抗体固定于活化磁性微球表面，所制备的免疫磁性微球具有识别和捕 系相结合，分别对癌胚抗原(CEA)和盘清总甲状腺素(飘)进行了测定。采用 双抗体夹心法对CEA进行了测定，测得CEA的线性范围为1．0～40．0 ng／mL，检 测限为1．0ng／mL，比四甲基联苯胺ELISA显色光度法低5倍；采用竞争法对T4 进行了测定，测得T4的线性范围为1．0～30．0ng／mL，检测限为1．0nedmL，比四 甲基联苯胺ELISA光度法低5倍。该方法操作简单、快速，用所建立的方法对病 人血清样品进行了测定，并与酶联免疫吸附测定光度法(ELISA)进行了对照， 二者相关性良好。 定AFP 采用柠檬酸三钠还原法制备纳米金粒子，通过控制还原剂柠檬酸三钠的加入 量，制得不同粒径的纳米金粒子。通过静电作用将HRP标记的甲胎蛋白(AFP) 抗体连接到纳米会粒子上。利用紫外．可见吸收光谱和荧光光谱分析确定纳米金粒 子与抗体连接时所需抗体的最佳浓度为0．6 gg／mL。 发光体系相结合，采用双抗体夹心法，对AFP进行了测定，并与直接加入酶标抗 体的方法相比较。酶标抗体标记方法测定AFP的线性范围为1．0～50．0ng／mL， 检测限为1．0ng／mL；纳米金作为酶标抗体标记物测定AFP的线性范围为0．1～ 50．0 ng／mL，检测限为O．1ng／mL，比四甲基联苯胺ELISA显色光度法低50倍。 用所建立的方法对病人血清样品进行了测定，并与酶联免疫吸附测定光度法 (ELISA)进行了对照，相关性良好。 关键词：化学发光增强剂免疫分析磁性微球纳米金肿瘤标记物 STUDlESONTHENEWE阿时ANCED CHEMILUMINESCENCESYSTEMOF IN ANDITSAPPLICATION LUMINOL-·H202·-HRP—-BPB MAGNETICENZYⅣ匝．LINKEDIⅣm仉丁NOASSAY ABSTRACT becomeamoreandmore Chemiluminescence(C劲has popularanalytical toits techniqueowing simple dynamicrange， and thesisstudiedanovelCL reproducibility,simplicityrapidity．TIlis enhancer,