寡聚酰胺-丝组二肽缀合物的设计合成、质谱解析及其切割DNA活性研讨.pdf

摘要 摘要 核酸切割剂在核酸化学研究领域中有至关重要的作用。在DNA突变，癌变以 及细胞死亡等研究领域，核酸切割剂是一个很好的分子生物学工具，更是设计基 因药物的模版。基于丝组二肽对DNA的切割活性和聚酰胺的特异性识别功能， 本论文主要研究了寡聚酰胺．丝组二肽缀合物(N02-PyPyIm—SerHis)的设计合成、 质谱解析及其切割DNA活性研究。 1．通过卤仿反应和DCC／HOBt偶合反应合成酰胺键，首次合成了寡聚酰胺 一丝组二肽缀合物。该合成路线反应条件温和，产率适中。在目标分子的 合成设计中，由寡聚酰胺作为该分子的DNA识别片断(DNA—Binding Motif, Motif,DBM)，同时，柔性链(LinkerMotif,LM)与活性片断(Active AM)Ser-His的组氨酸残基c端相连，保证切割活性基团一丝氨酸残基 上氨基和侧链羟基的状态和相对位置。生物活性实验验证此设计是合理 的。 NMR)和电 NMR和”c 2．利用高分辨质谱、红外光谱、核磁共振谱(1H 喷雾质谱(ESI-MS和ESI—MS／MS)分析鉴定化合物的结构，并分析总 结了其质谱裂解规律。 3．在电喷雾质谱研究过程中，首次发现：质谱裂解过程中产生的某些酰胺 类碎片离子和酯类化合物在离子阱中容易发生水解现象，并利用分子内 的氨基催化分子离子水解反应的原理对此不常见的特征性裂解进行了详 细解释。这可为同类酰胺或酯的质谱裂解规律和结构解析提供快捷、准 确的依据。 4．论文首次提出在电喷雾质谱的裂解过程中，分子离子／碎片离子经过四元 环、五元环和六元环过渡态发生氢重排，失去一个较为稳定的中性分子， 趋于生成共轭体系的碎片离子。而当分子有羟基存在时容易发生酰胺键 脱水现象。 5．利用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳两种方法测定了在B．R和Tri．HCl缓冲 溶液中寡聚酰胺．丝组二肽缀合物与DNA的相互作用。发现Tri．HCl抑 摘要 制目标分子切割DNA。两种方法得到的实验结沦是相吻合的。虽然我们 没有观察到寡聚酰胺一丝组二肽缀合物特异性地切割DNA，但琼脂糖凝 胶电泳图谱证明我们所合成的寡聚酰胺一丝组二肽缀合物 于识别片断·(DBM)寡聚酰胺的存在增加了活性片断(AM)Ser-His的 局部浓度，相应地提高了活性片断(AM)丝组二肽切割DNA的活性。 切割剂，同时具有发展成为抗肿瘤前药的潜力。为设计合成更有效的特异性切割 DNA化合物，提供了理论和实践基础。 关键词：寡聚酰胺一丝组二肽缀合物，DNA的切割，裂解规律 Abstract Abstract Artificialnucleicacid have cleavageagents attractedconsiderableattentionon and Aswea11 aminoacids synthetic know,the biologicolpart histidine(His)and as amino acidsinthe sitesofsuch serine(Ser)ffmctioncatalytic active