几种不同食性鱼同工酶及草鱼lpl基因的分子分析-molecular analysis of isozymes and lpl gene of grass carp in several different feeding habits.docxVIP

摘要鱼类和所有其他生物一样，生存生长过程中需要营养物质提供生命活动所需的能量。鱼类在进化过程中，分化出不同的食性，鱼类按照食性可分为肉食性、植食性、杂食性类型，在水生生态系统中各自发挥着不同的功能。本文研究不同食性鱼酯酶（EST）及α-淀粉酶（α-AMY）同工酶的表达差异及相互关系和几种不同食性鱼LPL基因序列差异，从分子角度研究鱼类能量传输途径的差异，对认识水生态系统中鱼类不同食性的形成及功能作用具有重要意义。本研究分为两个部分，第一部分为同工酶研究，采用不连续聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳法分析不同食性鱼的酯酶（EST）和α-淀粉酶（α-AMY）同工酶特性；第二部分为基因研究，应用基因克隆技术，对草鱼LPL基因部分序列进行克隆与分析，了解不同食性鱼的LPL基因差异。同工酶研究，采用不连续聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳法，对广东鲂（Megalobrama terminalis）、?（Hemiculter leucisculus）、鲮（Cirrhina Cuvier）、草鱼（Ctenopharyngodon-idellus）、青鱼（Mylopharyngodon piceus）、鳜（Siniperca- chuatsi），6种不同食性鱼的肝脏、肌肉、心脏、眼、鳃、肾组织进行研究，分析酯酶（EST）及α-淀粉酶（α-AMY）同工酶，得到同工酶电泳图谱。根据谱带迁移率的不同，获得19 种EST 同工酶，分别为EST1~EST19；α-AMY同工酶共检测到5 种，分别为α-AMY1~α-AMY5。结果表明：这六种不同食性鱼6 种组织中均存在EST 和α-AMY同工酶的分布，他们具有明显的组织特异性；在这些鱼中EST 同工酶的种类和表达程度较α-AMY同工酶都占优势；肝脏和肾脏中EST 和α-AMY同工酶的活性高于其他组织；EST 和α-AMY同工酶，在不同食性鱼中表现出明显的差异，通过对EST 和α-AMY同工酶的特性分析，可了解并研究鱼类当前的食性状态，进一步掌握鱼类栖息环境的营养源与生态状况。基因研究，针对草鱼LPL基因序列进行克隆分析。应用PCR技术，获得长度为1058bp 的LPL基因部分序列，对其进行分析，结果表明得到1058bp 序列，包括外显子I部分68bp，外显子2 部分169bp，和内含子I全长821bp。外显子部分与NCBI数据库中查询得到的草鱼脂蛋白酯酶（LPL）基因mRNA序列（FJ716100.1）相应的外显子部分相似度为99.58%。测得的草鱼脂蛋白酯酶（LPL）基因外显子部分序列与NCBI数据库中查询的5种鱼类的脂蛋白酯酶（LPL）基因序列的相应部分进行相似性比对，结果显示，草鱼和鲢、团头鲂、翘嘴鲌、鲤、鲫相似度分别为：98.3%、95.8%、95.8%、84.4%、83.5%；草鱼和鲢；翘嘴鲌和团头鲂；鲤和鲫分别聚在一起，然后再聚为一支。关键词：同工酶；电泳；食性；脂蛋白酯酶；克隆AbstractLikeanyotherspecies,fishalsoneedlotsofnutrientsthatprovideenergyfortheirlife activities,suchasgrowthanddevelopment.Intheprocessofevolution,fishdifferentiatedinto manykindsof feedingfishes(carnivorous,phytophagous,filterfeeders,omnivorous),whichall playanimportantroleinaqueoussystem.Molecularstudiesontheshapingoffish’sfood feedingandthedifferencesofenergychannel,whichisbebefitforunderstandingthefounction of fish.Thisstudywasdividedintotwoparts,thefirstpartisanalysisofESTisozymeand–AMY isozymeindifferentfishes.Thesecond partisaboutcloningandanalyzingofpartialLPLgenein different fish.First part, byusingpoyacrylamidgelelectrophoresis, two isozyme（sEST, α-AMY）in liver，muscle,heart,eye,gill, kidneyofsixkindofadultfish（Megalobramaterminalis、Hemiculter leucisculus、Cirrhin