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实验九 细胞组分分级分离
通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分，了解其原理、过程及作用。 实验内容 细胞核的分离提取 高速离心分离提取线粒体 细胞核的分离提取步骤： 1.椎脱臼法法处死小鼠，迅速开腹取肝脏，剪成小块，置于盛有0.9％NaCl烧杯中，反复洗涤，除去血污，用滤纸吸去表面的溶液。 2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，取8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，先加入少量该溶液于平皿中，尽量剪碎组织后，再全部加入。 3.将剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，研磨3～5次，用8层湿纱布过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片①，做好标记，自然干燥。 4.将装有滤液的离心管配平后，放入离心机，2500r/min离心15分钟；⑴取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中，待分离线粒体用;⑵同时涂一张上清液片②做好标记，自然干燥；⑶余下的沉淀物进行以下步骤。 5.用6ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，悬浮沉淀物，以2500r/min离心15分钟弃上清，将残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载玻片上，涂片③，自然干燥。 6.将①、②、③涂片用1％甲苯胺兰染色后盖上盖片即可观察。 高速离心分离提取线粒体步骤： 1.将上述装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出，配平后，以17000r/min离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。 2.加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙液1ml，用吸管吹打成悬液，以17000r/min离心20分钟。将上清吸入另一试管。留取沉淀物，加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液。 3.取沉淀物上清液和悬液，分别滴一滴于干净的载玻片上（分别标记为④、⑤），涂片，各滴一滴0.02％詹纳斯绿B染液，盖上盖片染20分钟。 4.油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色。 1.简要说明分级分离细胞的原理及其意义。 2.比较一下分离细胞核时涂片①、②、③有什么不同？涂片③在你的实验结果中纯度如何？ 3.描述一下涂片⑤所见结果。 * * 细胞组分的分级分离 实验九 实验目的 细胞内不同结构的比重和大小都不同。在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理，用不同的转速的离心法，可将细胞内各种组分分级分离出来。 实验原理 速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀 1．研磨时要在低温进行。 2．过滤前要先将纱布湿润。 3．离心前要注意配平。 注意事项 作业与思考 * * * *
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