06药品微生物检验现状及2010年版药典微生物检查框架.ppt

地西泮注射液无菌检查 薄膜过滤法 CP：只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法； USP：无菌检查法首先采用薄膜过滤法检查，如该方法不适用，可采用直接接种法。 结果总结与报告 综合分析实验中遇到的所有情况，最终形成一份详细、严谨、具有可操作性的验证报告。 给出该品种的标准检验规程，规程中应明确样品前处理步骤、采用的具体方法，以及各方法操作的关键点，以供检验参考。 方法验证实验报告——标准的技术文件。 用语规范 强调严格采用药典用语 震荡-振摇，三角瓶-锥形瓶， 大肠杆菌-大肠埃希菌， 绿脓杆菌-铜绿假单胞菌， 破伤风杆菌-破伤风梭菌， 混匀-摇匀， 平皿-平板， 菌苔-新鲜菌苔， 生药-药材， 革兰氏染色-革兰染色， 沙门氏菌-沙门菌，…… 什么时候验证？ 当建立药品的……方法时，应进行……方法的验证； 若药品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。 When? 不验证： 已经验证过的 参照质量体系中其他项目的执行情况 验证以后怎么办？ 无菌检查：进行供试品无菌检查时，所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。 微生物限度：检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌酵母菌菌数的测定；供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培养基的实际用量同控制菌检查方法的验证。 检验方法的各论化！ 何时验证？ ——什么时候不验证？ 没有检验方法建立检验方法——方法验证 引用检验方法核实检验体系——阳性对照（无菌） 方法适用性（限度） 方法验证实验工作的完善和发展 一方面以验证实验为手段和契机，充分完善和细化我国无菌和微生物限度检查方法，建立起完备的SOP体系。 另一方面集中力量尽快完成我国数以千计的品种的检验方法的初步验证实验，并收集、整理、分析已有验证资料，指出各品种验证实验的发展方向。 通过方法验证促进我国药品微生物检验工作全面发展。 《微生物限度检查法应用指导原则》第五条。 谢谢大家！ * * * * 定量检验的方法验证 1、准确度 准确度是指替代方法的检验结果与药典方法检验结果的一致程度。准确度的确认应在检验的范围内。通常用微生物的回收率（％）来表示准确度 。 验证的菌浓度应该在检测范围内，并且至少应该有5种浓度以上，每种浓度重复检验5次。 替代方法的回收率应该达到70％以上 当替代方法并不依赖微生物生长出菌落或出现混浊来进行定量时，可能出现回收率高于药典方法的情况。 对验证数据应进行必要的数学处理，如对数转换，然后对上述数据采用t检验分析处理。 定量检验的方法验证 2、精密度 精密度是指在检验范围内，对同一个均匀的样品多次重复取样，其检验结果的一致程度。微生物定量检验的精密度通常采用标准偏差或相对标准偏差（变异系数）来表示 。 验证的菌浓度应该在检测范围内，并且至少应该有5种浓度以上，每种浓度重复检验10次。 可以接受的相对标准偏差（RSD）应不大于35％。在该项目上，USP 的规定是15％～35％，研究表明，当含菌浓度在30～300cfu/ml时，计数结果的RSD完全可能在15％以内，因此，指导原则中对该指标作了修改。 替代方法的相对标准偏差（RSD）应不大于药典方法 。 对验证数据可采用t检验分析处理。处理时，应分别评价每种浓度下两种方法计数结果的差异以及两种方法在不同浓度下获得的RSD值的差异。 定量检验的方法验证 3、专属性 专属性是指通过检测适宜的试验菌，以证明检验方法与其设定目的相适应的能力。 例如，菌落计数平皿法其设定目的在于检出一定数量的微生物，则其专属性验证应证明当样品中存在一定数量的试验菌时，通过平皿法检验，能够检出试验菌，而样品的存在不会对结果造成影响。 验证的关键是合理评价样品的存在对检验结果的影响，当替代方法不依赖微生物生长出菌落或出现混浊就可以定量时 ，这种评价显得尤为必要。 对验证数据可采用双因素方差分析的方法进行统计分析，以确定不同样品间以及两种方法间是否存在差异。 定量检验的方法验证 4、定量限 定量限是指样品中能被准确检验的微生物最低数量。 验证的关键是在检验范围的低限，选择尽可能低的5种菌浓度，每种浓度重复测定5次，替代方法的定量限不得大于药典方法。 对验证数据可采用t检验分析处理。 定量检验的方法验证 5、线性 线性是指在检验范围内，检验结果与样品中微生物数量成比例关系的程度。 线性验证时必须覆盖检验的范围。 在对验证数据进行处理时，应以样本中预期的菌浓度为自变量，以不同方法的计数结果为应变量，进行线性回归分析，计算相关系数，不得低于0