Role of the Endothelial-Derived Endogenous Anti ：的内皮细胞内源性抗作用.pptVIP

Role of the Endothelial-DerivedEndogenous Anti-Inflammatory Factor Del-1 inInflammation-Mediated Adrenal Gland Dysfunction内皮细胞起源的内源性抗炎因子Del-1在炎症相关的肾上腺功能紊乱中的作用 汇报人：王淳 2013.9.10 Role of the Endothelial-Derived Endogenous Anti-Inflammatory Factor Del-1 in Inflammation-Mediated Adrenal Gland Dysfunction Waldemar Kanczkowski,* Antonios Chatzigeorgiou,* Sylvia Grossklaus, David Sprott, Stefan R. Bornstein,* and Triantafyllos Chavakis* Department of Internal Medicine III, Technical University Dresden, D-01307 Dresden, Germany Endocrinology, March 2013, 154(3):1181–1189 IF :4.993 一、实验背景 二、实验目的 三、实验方法 四、实验结果 五、讨论 实验背景 脓毒症是来源于侵袭性感染和机体对感染的不适当的反应的一个复杂的综合症状。 脓毒症期间HPA轴等应激系统广泛被激活，促进垂体释放ACTH和肾上腺皮质释放皮质醇。但是病情严重的患者破坏了肾上腺自我平衡的适应性和糖皮质激素产生的增加，特别是在严重疾病的慢性期或迁延期血浆ACTH与总皮质醇水平是不相称的。 虽然肾上腺功能不全与高死亡率相关，但是脓毒症引起的肾上腺功能不全机制仍不清楚。 在脓毒症期间炎症反应会引起致命的多器官衰竭。 白细胞粘附于内皮细胞及外渗主要由白细胞整合素介导的，Del-1是内皮细胞维持自我稳态的一个重要因素。 内皮细胞功能紊乱是脓毒症相关的器官衰竭的重要特征，而肾上腺是一个血供丰富的器官，因此推测脓毒症期间，肾上腺内皮细胞稳态的破坏可能引起肾上腺功能紊乱。 实验方法 建立全身炎症反应综合症（SIRS）动物模型 选C57BL/6野生型和Del-1敲除小鼠小鼠（10-12个月），LPS溶于PBS后腹腔注射，于注射后0h，3h，24h处死。 ELISA法检测血浆皮质酮和ACTH浓度。 半乳糖苷染色检测内源性Del-1表达。 免疫荧光和缺口末端标记。 人肾上腺皮质初代细胞的培养 成人（50-75岁）诊断肾癌，行肾癌根治术后取肾上腺组织，提取肾上腺初代细胞。 Real-time PCR 检测小鼠Del-1，IL-1β，TNF，ICAM-1，VCAM-1，PGRP，MIF，MCP-1 mRNA 图1.A 小鼠不同部位Del-1的mRNA表达 B 人不同细胞中Del-1的mRNA表达 C 半乳糖苷染色定位Del-1表达，主要位于肾上腺包膜下 D 免疫荧光对肾上腺脉管系统染色 图2.注射不同浓度LPS及注射后不同时间点Del-1的变化 图3.A 野生小鼠与Del-1敲除小鼠HPGRP表达的对比B和C 野生小鼠与Del-1敲除小鼠HE染色的对比 图4.不同时间点Dex-1敲除小鼠与野生小鼠不同炎症因子RT-PCR结果 图5.野生小鼠和Del-1敲除小鼠术后不同时间血浆皮质酮和ACTH 图6.缺口末端标记法（TUNEL）检测不同小鼠肾上腺细胞凋亡 实验结果 1.在小鼠和人类肾上腺都存在Del-1 2.LPS减少了Del-1的表达 3.Del-1缺失增强了肾上腺炎症反应 4.Del-1敲除小鼠证明LPS注射后24小时HPA轴活性降低和肾上腺细胞凋亡增加 讨论 Del-1在SIRS中不只与炎症、白细胞聚集和细胞凋亡相关，还与HPA轴修复功能相关。 由于Dex-1缺失引起肾上腺炎症反应的增加导致与野生小鼠相比Dex-1敲除小鼠在LPS处理后24小时肾上腺细胞凋亡明显增加并且血浆皮质酮明显下降。 IL-1β和TNF可能促进产生类固醇细胞的凋亡。 Del-1对于肾上腺炎症反应起到重要的调节作用 在全身炎症反应初期，血浆皮质酮与垂体分泌的ACTH是紧密相关的，然而在Del-1敲除小鼠中注射LPS后24小时ACTH水平下降，除了局部炎症和凋亡意外，HPA轴功能失调导致皮质酮产生减少也起到重要作用。 谢谢！