转录因子junb调控肌细胞蛋白质合成机制的研究-动物营养与饲料科学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文转录因子JunB调控肌细胞蛋白质合成的机制研究目录摘要．．iAbstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iii缩略语表vi第一章文献综述ll前言12决定肌肉生长发育的生物学事件．22．1出生前生长：成肌细胞分化32．2出生后生长：卫星细胞融合与蛋白质沉积43蛋白质的生物合成及蛋白质合成速率的调控．53．1蛋白质翻译起始及调控翻译起始速率的主要信号通路63．1．1 mTOR信号通路．63．1．2 elF2信号通路．73．1．3 myostatin—Smad信号通路一83．2蛋白质翻译延长及翻译延长速率的调控93．3蛋白质合成与降解的互作调控．123．3．1促进蛋白质合成并抑制蛋白质降解的节点一123．3．2促进蛋白质降解并抑制蛋白质合成的节点．．134检测蛋白质合成的方法144．1同位素示踪法．144．2 SUNSET非放射方法154．3多聚核糖体分析技术与核糖体分析技术．165转录因子JunB的研究进展．175．1 JunB的生化特征．185．1．1 JunB的基本结构及其DNA识别序列185．1．2 JunB活性的调控一185．2 JunB的功能研究．195．2．1 JunB调控细胞增殖．．19万方数据华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文5．2．2 JunB调控肿瘤生成195．2．3 JunB调控骨骼肌蛋白质合成206研究假设的提出及研究的目的意义20第二章运用SUNSET非放射性方法研究蛋白质翻译及检测蛋白质合成速率．．22 1前言．．222材料与方法232．1试验材料．232．1．1细胞．232．1．2主要试剂232．1．3主要仪器242．2试验方法．242．2．1试剂配制242．2．2细胞培养252．2．3试验设计252．2．4蛋白样品的制备262．2．5 Western Blot分析及灰度扫描并作图．．262．2．6统计分析．263结果与分析_．273．1确定孵育C2C12肌管的最佳嘌呤霉素浓度273．2运用SUNSET方法检测胰岛素和雷帕霉素对C2C12肌管蛋白质合成速率的影响．283．3运用SUNSET方法检测CCCP对C2C12成肌细胞蛋白质合成速率的影响293．4运用SUNSET方法检测饥饿对C2C12成肌细胞蛋白质合成速率的影响303．5运用SUNSET方法检测不同条件处理对C3H10T1／2细胞蛋白质合成速率的影口F日3 14讨{仑．．324．1嘌呤霉素浓度及含嘌呤霉素的培养基的选择．324．2 SUNSET方法检测由翻译起始速率引起的蛋白质合成速率的变化334．3 SUNSET方法检测由翻译延长速率引起的蛋白质合成速率的变化33万方数据转录因孑JunB调控肌细胞蛋白质合成的机制研究4．4 SUNSET方法检测由翻译起始和延长速率引起的蛋白质合成速率的变化344．5小结．35第三章转录因子JunB调控C2C12细胞蛋白质合成机制的研究．．361前言．362材料与方法372．1技术路线．372．2试验材料．382．2．1细胞、菌株及质粒．．382．2．2主要试剂和试剂盒．．382．2．3主要仪器．．382．3试验方法．39213．1试剂配制．．392．3．2细胞培养一402．3．3试验设计．．402．3．4蛋白样品的制备。402．3．5 Western Blot分析及灰度扫描并作图．402．3．6质粒构建一412．3．7总RNA提取、纯化和反转录462．3．8荧光定量PCR一462．3．9统计分析．．463结果与分析463．1构建JunB过表达质粒并在C2C12成肌细胞验证过表达效果．473．1．1 JunB过表达质粒的构建一473．1．2 Q—PCR和Western Blot鉴定JunB过表达效果．473．1．3 C2C12成肌细胞分化过程中JunB的表达模式．483．2 JtmB siRNA的设计合成、筛选及敲低效果验证493．3运用SUNSET非放射性方法检测JunB对C2C12细胞蛋白质合成的影响．493．4检测JunB是否通过Akt／mTOR影响C2C12细胞蛋白质合成．503．5检测JunB对核糖体生成的影响5lIII万方数据华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文3．6检测JunB对翻译起始因子elF20t蛋白磷酸化的影响523．7检测JunB对翻译延长的影响533．8检测JunB对myostatin．Smad信号通路的影响553．9检测myostatin通路对翻译延长的影响563．10 HEK293T细胞异位表达Ju