神经干细胞的研究方法【精品-PPT】.pptVIP

神经干细胞的研究方法;b;干细胞概念与基本特性;干细胞概述;干细胞的类型（根据分化潜能的差异分）;干细胞的类型 （根据取材来源的组织发育阶段分）;EC 和ASC（组织干细胞）的区别 ; 1981年Evans和Kaufrnan及Martin首次由 小鼠中分离得到鼠的胚胎干细胞。 至今已分离得到的胚胎干细胞物种有： 金黄地鼠（1988）、貂（1993）、猪（1994， 1997）、鸡（1996）、恒河猴（1995）、绒猴 （1996）。 分离得到人的胚胎干细胞（1998）， 分离得到人的胚胎生殖细胞（1998）， 目前不断报道成年组织来源的的干细胞。;研究干细胞的科学意义;神经干细胞概念和应用;神经干细胞研究历史，现状与研究内容;　神经干细胞的特点;神经干细胞通过两种方式生长;神经干细胞的标记;神经干细胞的分化机制;与神经干细胞诱导分化的细胞因子有;;神经干细胞的分布;神经干细胞的应用;神经干细胞应用中存在的问题;展望;展望;神经干细胞的培养方法; 神经干细胞的培养方法;材料与方法;实验方法：;神经干细胞克隆球的诱导分化和免疫细胞化学鉴定：; 将以上原代及传代的神经干细胞球取出，离心后反复小心吹打并用0.25%胰蛋白酶消化5-10分钟离心再吹打制成单个细胞悬液，记数后相继以100倍、50倍、10倍的稀释度接种到96孔板中。每天观察其生长情况并照相。7天后选取只有一个细胞形成的单细胞克隆球并标记。10天后将单细胞克隆球 吸出机械分离制成单个细胞悬液接种到25ml的小培养瓶中，待次代克隆形成后连续传代。 ; 1 神经干细胞分离和传代 取新生当天24h内的乳鼠，酒精消毒后断头取脑，分离出双侧大脑皮质及中脑置于DMEM培养液中，小心剥离出脑膜及血管，PBS洗两遍；用眼科剪剪碎成糊状转入10ml离心管中，加DMEM/F12基础培养液，用细口吸管小心机械吹打，擦镜纸过滤后获得单细胞悬液并计数；以1×107个细胞/ml浓度接种到75ml培养瓶中，加入2% B27添加剂、终浓度为20ng/ml的EGF和20ng/ml的 bFGF后置37℃、 5%CO2孵箱中培养。 ;;26aeimquyCGKOSW#-26aejnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(059dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlpuyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048chlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)15aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-27bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*+37bfjnrvzDHLPTX!*048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY$(048cgkoswAEIMQUY%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRVZ%)159dhlptxBFJNRV#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOSW#-26aeimquyCGKOTX!*+37bfjnrvzDHLP