银川引种金叶接骨木中熊果酸和齐墩果酸含量测定.docVIP

银川引种金叶接骨木中熊果酸和齐墩果酸含量测定 　　 项目来源：宁夏医科大学2009年校级面上项目，项目编号：XM200904 　　作者简介：赵淑红，女，副教授，主要从事生药学教学工作。摘要：目的：建立高效液相色谱法测定金叶接骨木茎叶中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，同时测定金叶接骨木中熊果酸和齐墩果酸含量。方法： 采用Thermo ODS-2HYPERSIL(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（80%:20%）；检测波长210nm，流速0.8mL/min，柱温25℃。结果：齐墩果酸的线性范围为12.17～243.36g（r=0.9999），回收率为98.50%（RSD为3.03）；熊果酸的线性范围为3.25～64.92g（r=0.9998），回收率为99.49% （RSD为1.37）。结论：本法操作简单,测定结果准确,可用于金叶接骨木中齐墩果酸与熊果酸的含量测定。 　　关键词：金叶接骨木；齐墩果酸；熊果酸；高效液相色谱法 　　 　　【中图分类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2012)02-0343-01 　　金叶接骨木（Sambucus canadensis.‘Aurea’）为忍冬科接骨木属植物加拿大接骨木(Sambucus Canadensis L.)的彩色叶变种，我区作为观赏植物从外地引进并在银川地区栽培[1]。接骨木属植物有着广泛的临床药用价值，其中齐墩果酸、熊果酸是接骨木属植物抗病毒性肝炎活性成分，临床用于治疗急性病毒性肝炎疗效显著[2]。本人在前期的实验中检测出金叶接骨木的茎叶中含有熊果酸、齐墩果酸等化学成分[3]。金叶接骨木能否如接骨木属其他植物一样具有药用价值，本文对银川地区引种的三年生金叶接骨木茎叶中齐墩果酸和熊果酸两种成分进行含量测定，并建立高效液相色谱法测定金叶接骨木中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，为进一步开发和利用其植物提供科学依据。 　　1仪器与试药 　　1.1仪器:日立L2000高效液相色谱仪（L-2455DAD）检测器，L-2300柱温箱，L-2200自动进样器，L-2130四元泵，分析天平（AP210，十万分之一），超声波提取器（KQ-500B），中药材粉碎机（FW100型）。 　　1.2试药:齐墩果酸对照品（批号110742-200314，中国药品生物制品检定所）；熊果酸对照品（批号8502，中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯，美国TEDIA）；乙腈（色谱纯，美国TEDIA）；娃哈哈纯净水；其它试剂均为分析纯。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件:色谱柱：美国进口Thermo ODS-2HYPERSIL(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（80%:20%）；检测波长：210nm，流速0.8mL/min，柱温：25℃。 　　2.2对照品溶液的制备:分别精密称量熊果酸对照品5.0mg、齐墩果酸对照品1.3mg，共同置5mL容量瓶中，色谱甲醇溶解，定容，得熊果酸、齐墩果酸混合对照品溶液，临用前稀释。依据“2.1”项下色谱条件进样10μL检测，得色谱图1。 　　图1熊果酸、齐墩果酸对照品HPLC色谱图结果显示，齐墩果酸色谱峰保留时间为28.00min，熊果酸色谱峰保留时间在29.59min，两者能够基线分离。 　　2.3供试品溶液的制备:分别取金叶接骨木的叶和茎药材，粉碎，过80目筛，60℃干燥至恒重。分别精密称取适量（相当生药0.5g），置200mL具塞三角锥形瓶中，加入甲醇10mL，超声提取40min， 　　冷却，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中得金叶接骨木叶和茎药材供试品溶液。 　　2.4线性范围考察:取稀释后的齐墩果酸、熊果酸混合对照品溶液（齐墩果酸、熊果酸浓度分别为243.36μg/mL、64.92μg/mL），分别稀释1.5、2、3、4、10、20倍后按“2.1”项下色谱条件进样检测，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标进行线性回归。齐墩果酸回归方程C=0.0001A+3.4405，r=0.9999，表明齐墩果酸在12.17～243.36μg/mL浓度范围内线性关系良好；熊果酸回归方程C=4×10-5A+0.9791，r=0.9998，表明熊果酸在3.25～64.92μg/mL浓度范围内线性关系良好。 　　2.5稳定性试验:取同一金叶接骨木叶供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，考察其稳定性。记录峰面积，计算齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD分别为0.63%、0.81%。表明供试品溶液在24h内基本稳定。 　　2.6精密度试验:取同一金叶接骨木叶供试品溶液，连续进样6次，记录峰面积，计算齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD，RSD分