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锌盐对体外呼吸道合胞病毒作用研究 　　[摘要] 目的 研究锌盐抗呼吸道合胞病毒的作用。 方法 采用细胞病变抑制实验，观察锌盐在HEP-2细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用，以抑制指数为评价指标。 结果 硫酸锌和醋酸锌在10～100 μm/mL时，对细胞无毒性作用。先病毒后锌盐试验50 μm/mL浓度的硫酸锌和醋酸锌，抑制指数为2。先锌盐后病毒试验结果显示：25 μm/mL浓度的硫酸锌和醋酸锌，抑制指数为4。 结论 锌对呼吸道合胞病毒（RSV）有直接杀伤作用，规律补锌可以预防呼吸道合胞病毒感染。 　　[关键词] 呼吸道合胞病毒；锌盐；抑制指数 　　[中图分类号] R725.6[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）04（b）-0041-02 　　呼吸道合胞病毒是婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体[1]。锌是人体重要的必需微量元素之一，它是酶的组成成分或酶的激活剂，与维持机体正常免疫功能和免疫系统的形成、稳定、调节有重要的关系[2]，本研究通过体外实验，对锌盐抗呼吸道合胞病毒的能力进行研究，现报道如下： 　　1 材料与方法 　　1.1 病毒株和细胞株 　　HEP－2细胞由昆明生物所提供。RSV标准株（Long株）由中国药品生物制品检定所提供。 　　1.2 试剂 　　硫酸锌，市售优极纯；醋酸锌，市售优极纯，由昆明金晨云辉仪器有限公司提供。培养细胞用的试剂及一次性无菌耗材，均为美国GIBCO公司和日本日水公司生产。 　　1.3 方法 　　1.3.1 病毒对细胞半数感染量（TICD50）测定用Hep-2单层细胞瓶复苏RSV标准株后，将毒株按1×10-1～1×10-6稀释度分别接种单层24孔细胞板，每稀释度接种细胞板4孔，0.5 mL/孔，设细胞对照，37℃培养，连续观察7 d，按细胞病变（CPE）程度，用Reed-Muench法计算出细胞半数感染量TICD50（两孔细胞病变的稀释度）。 　　1.3.2 锌盐对细胞的毒性试验按硫酸锌和醋酸锌的分子量，配制出锌盐溶液，灭菌。用细胞生长液将硫酸锌和醋酸锌分别稀释成20 mmol/L、2 mmol/L，200 μmol/L和20 μmol/L四个浓度，与消化的细胞混合后，分别接种24孔细胞板，每个浓度种4孔，0.5 mL/孔，设细胞对照，37℃培养，连续观察7 d，以细胞100％贴壁生长且形态正常时所用的锌盐浓度为细胞的安全浓度。 　　1.3.3 先病毒后锌盐试???先用单层细胞板感染100倍TICD50的病毒，0.5 mL/孔，37℃培养2 h，分别加入细胞最大安全浓度锌盐，进行2倍稀释，取5个稀释浓度，即1/2～1/32，每浓度接种4孔，0.5 mL/孔，37℃培养，连续观察7 d，同时设细胞对照，病毒对照，按能产生CPE的锌盐浓度计算抑制指数（抑制指数=最大无毒浓度/最小有效浓度）。 　　1.3.4 先锌盐后病毒试验先于单层细胞板上分别加入最大安全浓度的锌盐（稀释倍数和接种浓度同1），每浓度接种4孔，0.5 mL/孔，37℃作用2 h后，每细胞孔均分别加入0.5 mL的100倍TICD50的病毒，同时设病毒对照及细胞对照，37℃培养，连续观察7 d，按能产生CPE的锌盐浓度计算抑制指数。 　　2 结果 　　2.1 细胞毒性作用 　　硫酸锌和醋酸锌在20～200 μmol/L时，对细胞无毒性作用。 　　2.2 先病毒后锌盐的试验结果 　　先病毒后锌盐的试验结果显示，100 μmol/L（醋酸锌10.97 mg/mL，硫酸锌14.37 mg/mL）浓度的硫酸锌和醋酸锌，未产生CPE。抑制指数为2。 　　2.3 先锌盐后病毒试验结果 　　先锌盐后病毒试验结果显示，25 μmol/L（醋酸锌7.18 mg/mL，呼吸道合胞病毒是婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体[1]。锌是人体重要的必需微量元素之一，它是酶的组成成分或酶的激活剂，与维持机体正常免疫功能和免疫系统的形成、稳定、调节有重要的关系[2]，本研究通过体外实验，对锌盐抗呼吸道合胞病毒的能力进行研究，现报道如下： 　　1 材料与方法 　　1.1 病毒株和细胞株 　　HEP－2细胞由昆明生物所提供。RSV标准株（Long株）由中国药品生物制品检定所提供。 　　1.2 试剂 　　硫酸锌，市售优极纯；醋酸锌，市售优极纯，由昆明金晨云辉仪器有限公司提供。培养细胞用的试剂及一次性无菌耗材，均为美国GIBCO公司和日本日水公司生产。 　　1.3 方法 　　1.3.1 病毒对细胞半数感染量（TICD50）测定用Hep-2单层细胞瓶复苏RSV标准株后，将毒株按1×10-1～1×10-6稀释度分别接种单层24孔细胞板，每稀释度接种细胞板4孔，0.5 mL/孔，设细胞对照，37℃培养，连续观察