GAPC2基因克隆及其在大肠杆菌中表达.docVIP

GAPC2基因克隆及其在大肠杆菌中表达 　　摘要：研究采用PCR法以拟南芥cDNA为模板扩增GAPC2基因片段，克隆至原核表达载体PET28a(+)上，经0.25、0.5mM IPTG分别在37℃和20℃诱导后，再使用SDS电泳检测融合蛋白的表达水平。结果表明：原核表达载体PET28a(+)-GAPC2构建正确，并且能在大肠杆菌BL21中成功表达，其融合蛋白分子量为37KD。 　　关键词：GAPC2；大肠杆菌BL21；IPTG；融合蛋白 　　中图分类号：Q946 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-04-0063-2 　　 　　三磷酸-甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)是高等植物体内糖酵解和糖异生途径中的关键酶，能够催化3-磷酸甘油醛转变为1,3-二磷酸甘油酸。位于细胞质中的GAPDH是由4个同种亚基GAPC组成的多聚体，而GAPC2编码该酶的C亚基。GAPC是一种与环境胁迫因子相关的酶类，在植物受到逆境胁迫（如热激、渗透、盐、缺氧）后能高效表达。近年来，有研究表明，GAPC在不同的组织中都有表达，且以在根组织中的表达量最高。另外，GAPC在细胞凋亡、DNA修复、核RNA输出以及细胞周期中都有着重要的作用，在厌氧、热激、渗透等逆境胁迫中可能发挥着重要作用。在前期的研究中，我