天然药物分离技术及结构表征3-1PPT.ppt

实际工作中，主要用于柱层析分离及色素和非极性杂质的吸附。粉末活性炭在具体运用中，也常拌入30～40%的硅藻土进行，以增加流速。 (4) 大孔吸附树脂： 广泛用于天然产物的分离，在水溶性成分的分离方面，显示出独特效果。白色球星颗粒状，粒度为20～60目，通常为非极性和中等极性两类。理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶媒。 特性及分离原理 :大孔吸附树脂为吸附性和筛选性原理相结合的分离材料，它本身具有吸附性，是由于范德华引力的结果。筛选性是由于其本身的多孔性结构所决定。因为有这些特性，使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。 大孔吸附树脂的应用范围 主要用于水溶性化合物的分离纯化。如皂苷、黄酮苷等化合物。还广泛用于工业废水、废液的净化等方面。 优点：用于工业化或大规模提取，具有成本低、再生容易、收率较好等特点。 预处理及再生 (5)聚酰胺 聚酰胺是由酰胺聚合而成的一类高分子物质。不溶于水及常用的有机溶剂，对酸稳定性差，对碱较稳定。 吸附能力来源于与化合物形成的氢键。 （二）展开剂 1. 基本要求 色谱展开用的溶剂一般需要重蒸馏或经过其他方法纯化处理，以除去干扰色谱的微量杂质，是一种溶剂或两种及两种以上的溶剂组成的溶剂系统。主要作用是解吸附。 2. 种类 亲脂性有机溶剂：石油醚、环己烷、四氯化碳 亲水性有机溶剂：丙酮、乙醇、甲醇等。 3. 解吸附能力 展开剂解吸附能力的大小与选择展开剂的极性和被分离成分的极性大小有关。 即被分离成分的极性大，展开剂的极性也要大，根据相似相溶的原理，这样成分才能随着展开剂移动而展开分离；反之，分离极性小的成分就要选择极性小的展开剂。 4. 常用溶剂极性大小 从石油醚、环己烷、四氯化碳、苯、甲苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、甲醇到水极性依次增大。 （三）被分离成分 若用亲水性吸附剂，被分离成分极性大者吸附牢固，解吸附就困难，色谱中展开的速度慢；反之，吸附能力弱，解吸附就容易。 化合物极性大小判断原则一般如下：分子中母核相同，极性基团越多，极性越大；分子中双键、共轭双键越多，极性越大；同系物中，分子量越小，极性越大；在同一母核中不能形成分子内氢键的化合物比能形成分子内氧键的化合物极性大。 三、吸附色谱的操作技术 吸附色谱操作形式: 吸附薄层色谱、吸附柱色谱。 （一）吸附薄层色谱操作技术 1. 吸附薄层板的制备 2. 点样:溶解样品的溶剂最好与展开剂极性相近，易挥发；吸取样液的毛细管管口要平整；点样位置距薄层板底1-1.5cm，斑点直径不超过2-3mm；点样量要适度。 3. 展开: 4. 显色 专属性显色剂，未知成分一般可选用碘蒸气熏或喷5%浓硫酸-乙醇液显色；具腐蚀性的显色剂只能用在硅胶G板上。 5. 比移值 比移值（Rf值）表示的是某一化合物经过展开后在薄层板上的相对位置。计算方法是原点到色斑中心的距离除以原点到溶剂前沿的距离，或为斑点移动的距离与溶剂移动的距离之比。Rf值越大表示该化合物展开的速度越快；反之，展开速度慢。一般来说Rf值与板的厚度成正比。 6. 应用 薄层层析在中药研究中是一种常用的分析手段，科研工作中也是一种最常用的分离分析方法。TLC可用于成分的分离，定性、定量检查，同时为其他的分析手段提供一定的分离依据。 （二）吸附柱色谱操作技术 1. 吸附柱色谱的制备 （ 1）吸附柱色谱的含义 吸附柱色谱是指将吸附剂（通常为100目--200目左右）装入色谱柱中用于分离化合物的操作技术。 （ 2）制备方法 干法装柱: 直接用小漏斗将吸附剂均匀装入柱内的方法。 湿法装柱: 将吸附剂装入盛有洗脱液的柱内，或将吸附剂与洗脱液混合成混是液再装入柱中。 （3）操作要点: 装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。 干法装柱时要用橡皮槌轻轻敲打色谱柱，使吸附剂装填连续均匀、紧密，然后用洗脱剂洗脱并保持一定液面； 湿法装柱时注意打开下端活塞，洗脱剂应始终保持一定的液面高度。 为了增强分离效果，提高分离速度，可在柱面覆盖一层处理干净的均匀的细沙。 2. 上样 （ 1）将样品溶于少量的洗脱剂中加于色谱柱顶端的操作。 （ 2）操作要点: 将样品溶于开始的洗脱剂中制成体积小、浓度高的溶液； 上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持吸附剂上端表面平整； 上样量为吸附剂的1/60-1/30。 3.洗脱检查 洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf值为0.2-0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱；用薄层色谱或纸色谱做定性检查，合并同一组分溶液。 硅胶、氧化铝