实验1微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色PPT.pptVIP

目的要求 掌握细菌涂片标本的制备方法及革兰氏染色法的步骤 识别细菌的革兰氏染色结果 学习无菌操作技术 细菌革兰氏染色 实验仪器、材料和用具 (1)显微镜、镜油、擦镜纸、擦镜液 (2)结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液 (3)载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、 (4)枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 液体培养液、牙垢 实验原理 实验步骤 涂片 左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜; 从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中; 干燥 在空气中自然干燥 用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过三次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜. 固定 3.95%的乙醇脱色：滴加95%的乙醇，轻轻摇动玻片进行脱色，直至流出的乙醇无紫色时，水洗； 染色步骤 1.结晶紫初染 ：滴加数滴结晶紫染液于细菌涂片上， 染色1分钟，水洗； 2.卢戈氏碘液媒染 ：用卢戈氏碘液覆盖涂片1分钟，水洗； 4.蕃红复染： 滴加蕃红染液复染2分钟以上，水洗，吸干镜检。 载玻片上滴加一滴香柏油，放油镜下镜检;注意标本中细菌的形态、大小,排列,和颜色 镜检 染色结果： 革兰氏阳性菌呈紫色; 革兰氏阴性菌呈红色; 金黄色葡萄球菌的染色结果 讨论 记录革兰氏染色结果,并描述形状,菌体排列和颜色, 看看与理论上是否相同;如不同,分析原因; 分析影响革兰氏染色结果的因素; 牙垢里大概能看到几类菌，哪几种较多？ 注意事项 载玻片是否干净,取菌量、合适的菌龄、 热固定及每一步水洗和酒精脱色程度是实验成功的关键 禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中 影响革兰氏染色结果的因素 ★菌龄：取处于对数生长期的细菌，此时结果典型。 ★操作： 热固定：温度不能太高，否则会造成细菌结构的破坏。 染色：染料应过量，避免结晶。 初染和媒染：时间在30-60s为宜。 复染：时间可稍长 脱色：约30s，以流下的脱色液无色为准,否则制片上会留有杂质或造成假阳性或假阴性。 水洗：要充分，否则制片上会留有杂质。 实验一 显微镜油镜的使用与保护 细菌形态结构的观察 细菌的革兰氏染色 实验目的 1）掌握显微镜油镜的使用和保护法 2）认识细菌的基本形态与特殊结构。 3）掌握细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法 的步骤、细菌的革兰氏染色结果。 4）学习无菌操作技术 实验内容： 1）显微镜油镜的使用方法； 2）观察细菌基本形态的染色装片； 3）观察几种常见细菌菌落； 4）进行革兰氏染色法的操作 实验原理 显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，影响显微镜的分辨率。 显微镜物镜中的油镜放大倍数最大，可达100X, 油镜使用需在载玻片与镜头之间滴加镜油（香柏油）。 油镜的基本原理 总放大倍数(物镜放大倍数x目镜放大倍数) 物镜的数值孔径 N A N A=n ? sin? n是指介质（空气、浸油等）的折射率； ?是孔径角的一半。  油镜的使用 增加照明亮度 油镜头焦距很短，直径很小，所需光照强度最大 增加显微镜的分辨率 显微镜性能的优劣主要决定其分辨率的大小。 为什么使用香柏油？ 当物镜与装片间的介质是空气（空气折射率n=1.0）时，光线会发生折射，使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度。 当介质为香柏油时，香柏油的折射率（1.52）与玻璃相近，光线可经过载片直接进入物镜而不发生折射，增加了照明度，更重要的是增加了数值孔径达到提高分辨率的目的。 显微镜使用方法 显微镜各部分名称 油镜的维护与保养 透镜的清洁 用无水乙醇和无水乙醚（3:7/4:6）擦拭镜头。尤其是用完油镜后。 干燥防止生霉 目的要求 巩固显微镜油镜的使用方法 认识细菌的基本形态和特殊结构 观察并描绘几种常见微生物的基本形态与特殊结构 微生物形态观察 实验仪器、材料和用具 显微镜、镜油、镜头纸、擦镜液 细菌装片：细菌三种基本形态装片及细菌特殊结构-芽孢、鞭毛、荚膜装片。 细菌基本形态观察 （1）观察金黄色葡萄球菌、八叠球菌装片。 注意菌体间的关系。 （2）观察枯草芽孢杆菌、大肠杆菌装片。 （3）观察螺菌装片。注意菌体的螺旋。 细菌的基本形态 Arrangement of Cocci球菌 A. arrangement of cocci B. staphylococcus arrangement C. streptococcus arrangement D. sarcina arrangement E. diplococcus arrangement Arrangements of Bacilli牙孢杆菌 A.