实验三+细菌的形态观察PPT.pptVIP

实验三 细菌的形态观察 一、实验目的 学习并掌握细菌的简单染色、革兰氏染 色以及芽孢染色法 2.? 初步认识细菌的形态特征 3.??巩固油镜的使用方法和无菌操作技术 二、实验原理 简单染色原理： 微生物细胞中含有大量的蛋白质等两性电解质：在酸性溶液中结合质子带正电；在碱性溶液中给出质子而带负电。等电点一般在pH=2~5。所以，在中性、碱性或弱酸性溶液中，微生物细胞通常带负电荷。碱性染料在电离时，染色部分带正电荷，容易与带负电荷的菌体结合使之着色。经染色后的菌体细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下很容易观察。 革兰氏染色原理 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 G+的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，经乙醇脱色细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，呈初染液结晶紫的紫色。 G–细胞壁含肽聚糖层较薄，类脂含量高，乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物易被洗脱，经番红复染后，而使细胞染上复染液的红色。 芽孢染色的原理 细菌的芽孢壁厚、不易着色，用着色力强的染色剂孔雀绿通过加热或延长染色时间而使菌体和芽孢着色，已着色的菌体水洗后可脱色，已着色的芽孢不易被洗脱，再经番红复染后，芽孢仍保留初染液的绿色，而菌体和芽孢囊被染成复染液的红色。 四、实验步骤 1.简单染色（枯草杆菌） 涂片 干燥 固定 染色（结晶紫染色1min） 水洗 干燥 镜检并绘图 枯草芽孢杆菌 2.革兰氏染色（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 ） 涂片 初染：涂面上滴加结晶紫染1分钟 水洗至无紫色 媒染:用哥氏碘液冲去残水，覆盖涂面1分钟 水洗 脱色：滴加95%酒精流洗脱色约30秒 立即水洗 复染：滴加番红染液染3分钟 水洗后用吸水纸吸干 镜检：观察染色结果并绘图。 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 3 枯草杆菌芽孢的观察 芽孢染色步骤 制片（涂片、干燥、固定） 染色（孔雀绿加热染色5min或静止延长染色20 min） 水洗脱色 番红复染5min 水洗 干燥后镜检绘图