实验二 细菌的特殊染色技术PPT.pptVIP

实验二 细菌的特殊染色技术 一、目的要求 学习并掌握芽孢染色法。 初步了解芽孢杆菌的形态特征。 学习并掌握荚膜染色法。 二、基本原理 用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或胶质装物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。 三、器材 菌种 枯草芽孢杆菌约2d营养琼脂斜面培养物；褐球固氮菌约2d无氮培养基琼脂斜面培养物。 染色剂 5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，绘图墨水。 仪器和其他用具 小试管，滴管，烧杯，试管架，载玻片，盖玻片，滤纸，木夹子，显微镜等。 水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲 洗，直至流出的水无色为止。 复染 用番红染液复染2min。 水洗 用缓流水冲洗后，吸干。 镜检 油镜观察。芽孢呈绿色，芽孢囊 及营养体为红色。 （2）荚膜的湿墨水染色法 制备菌和墨水混合液 加一滴墨水于洁净 的载玻片上，然后挑取少量菌 体与其混合均匀。 加盖玻片 将一洁净盖玻片盖在混合液 上，然后在盖玻片上放一张滤 纸，轻轻按压以吸去多余的混 合液。 镜检 用低倍镜和高倍镜观察，背 景灰色，菌体较暗，在菌体 周围呈现明亮透明圈即为荚 膜。 注意： 1 芽孢孔雀绿染色加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂膜干涸。 2 芽孢染色水洗时，勿用瀑水对着菌膜冲洗，以免细菌被水冲掉。 3 荚膜湿墨水染色时，加盖玻片勿留气泡，以免影响观察。