中医课件中药抗肝纤维化的实验.ppt

* 中药抗肝纤维化的实验 研究概况 肝纤维化是慢性肝损伤进展为肝硬化的一个重要阶段，主要特征是细胞外基质在肝内过度沉积。目前普遍认为，在这个阶段，肝脏的病变是可逆的，而肝硬化、原发性肝癌则不可逆转，因此，如何有效地防治肝纤维化，阻断其进展，已经成为国内外研究的热点。近年来中药治疗肝纤维化在临床研究和实验研究方面均取得了令人瞩目的进展，显示出了特有的优势。 1、单味中药及单体有效成分 氧化苦参碱 ：又名苦参素 ，是从中药苦豆子或苦参根中提取的一种生物碱，具有抗炎、抗病毒、免疫调节等作用。宋健等以NIH3T3成纤维细胞为靶细胞，用噻唑蓝（MTT）法及Northern杂交检测苦参素对NIH3T3成纤维细胞増殖及Ⅲ型原胶原mRAN的表达的影响。结果表明，苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及Ⅲ型原胶原mRAN的表达,并呈剂量依赖性。并采用CCI4制备肝纤维化模型，同时设立苦参素预防组及治疗组，发现苦参素可显著降低肝纤维化大鼠血清Ⅲ型前胶原（PC Ⅲ）、 层粘连蛋白（LN）及透明质酸（HA）水平，并能明显改善肝脏功能，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、血清白蛋白（ALB）、血清总胆红素（TB）等各项指标均改善，与模型组比较差异具有显著性（P〈0.01)。组织学检查显示，苦参素能降低肝纤维化程度，具有明显的防治纤维化作用。 杨文卓等参照Jonker的方法复制了大鼠半乳糖胺诱导肝纤维化模型，设立苦参碱预防观察组及治疗观察组，发现苦参碱可明显降低肝粉的羟脯氨酸含量，改善肝功能，组织学观察到预防用药组肝细胞变性轻，汇管区纤维间隔纤细，Ⅰ型、Ⅲ型胶原的沉积减少，治疗组病理改变也 较自然恢复组轻，得出结论：苦参碱对半乳糖胺诱导的肝纤维化具有明显的预防及治疗作用。王俊学等发现氧化苦参碱可阻断撤除苯巴比妥钠（PB）诱导的小鼠肝细胞的凋亡。据以上推测，氧化苦参碱可能通过以下环节达到抗纤维化作用：（1）抑制炎症的发生；（2）抑制肝星状细胞激活及成纤维细胞增殖。 川芎嗪：别名四甲基吡嗪，在伞形科植物川芎根茎及姜科植物温莪术等植物中存在，为一种提纯的生物碱。它具有改善微循环，増加冠状动脉血流量的作用。王红等应用50%CCI4油剂腹腔注射6周诱导出大鼠肝纤维化模型的同时，予川芎嗪溶液20mg/kg腹腔注射，每日1次，每周6次，共6周，结果川芎嗪治疗组的动物血清ALT水平，HA、PCⅢ及肝组织中丙二醛（MDA）含量均较对照组明显降低（P〈0.01），而肝组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性则明显增加（P〈0.05），同时病理组织学检查可见肝细胞变性坏死及胶原纤维增生程度均显著减轻，免疫组织化学染色示肝组织星状细胞数量明显减少，表明川芎嗪具有保护肝细胞、抗脂质过氧化及抗纤维化的作用。对于体外培养的成纤维细胞，川芎嗪能使成纤维细胞发生显著的形态改变，并能依制细胞的核分裂和増殖。 丹参及丹酚酸B：是近年来研究较多的抗肝维化药物。河北医科大学肝病研究所研究了丹参对肝纤维化大鼠肝组织匀浆和离体线粒体的抗脂质过氧化作用，结果表明，丹参可有效地抑制肝纤维化大鼠抗脂质过氧化产物MDA地产生，并增强SOD的活性，且两者均呈剂量及时间依赖性。采用MTT法测定丹参素对肝星状细胞的增殖抑制作用并检测细胞周期，发现丹参素作用后肝星状细胞的生长受到明显抑制，且抑制作用随药物浓度的增加而增强。流式细胞仪分析结果表明，随着丹参浓度的增加，凋亡的星状细胞明显增多。 镁一丹酚酸B是上世纪80年代后期从丹参中分离出来的一种水溶性成分，为含儿茶酚结构的化合物。现有研究发现，丹酚酸B能抑制体外传代培养的贮脂细胞的增殖，减少其胶原合成与分泌，从细胞水平证实了丹酚酸B具有抗纤维化的作用和部分机理。胡义杨等采用CCI4法及DMN法制备两种大鼠肝纤维化模型，予丹参提取物（含丹酚酸B75%）治疗，发现丹酚酸B可显著提高ALB含量并降低肝组织MDA含量及羟脯氨酸（Hyp）含量，病理学染色标本及免疫组化结果表明，丹酚酸B治疗组减轻了肝脏的炎症活动度，降低了肝纤维化程度，并推测其抗纤维化的作用机制与抗脂质过氧化作用有关。 牛磺酸：是从中药牛黄中提取的有效成分，具有多种细胞保护作用。李宝刚采用牛血清白蛋白静脉注射复制大鼠肝纤维化模型，并预防性使用牛磺酸，结果牛磺酸组动物的肝Hyp含量和肌成纤维细胞数量明显低于模型组，肝切片中胶原沉积明显减轻。陈岳祥对CCI4诱导的大鼠实验性肝纤维化的研究表明，牛磺酸能明显降低肝Hyp和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA含量，降低HA和LN水平，改善肝功能和肝组织学的病理变化。其它：甘草酸可降低由CCI4联合乙醇所致的不同阶段的肝纤维化大鼠星状细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达，减少肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积，尤以早期、中期明显。体外试验