医学PPT课件电化学免疫传感器的应用.ppt

电化学免疫传感器的应用 分析化学专业 丁红红 目录 1 前言 免疫分析 电化学免疫分析 2 电化学免疫传感器 免疫传感器 电化学免疫传感器 3 发展及展望 前言 1.免疫分析（Immunoassay） 概念 ：基于用抗体或抗原作为选择性化学试剂以分析测定抗原或抗体及半抗原的分析方法。分子识别材料：抗原或抗体 分子识别基本原理：Ag十Ab Ag·Ab 分类 放射性免疫分析（RIA） 酶联免疫分析 （ELISA） 发光免疫分析 （LIA） 电化学免疫分析（ECIA） 电化学免疫分析法 是将免疫技术与电化学检测相结合的一种分析方法 1951年，由Breyer和Radclif首次应用，极谱法测定由偶氮标记的抗原 六七十年代后 电分析技术方法的发展： 液相色谱电化学分析 电化学流动注射分析 微分脉冲伏安法 阳极溶出伏安法 电化学免疫传感器 1 免疫传感器 与测定抗原抗体反应有关的传感器 1990年Henry等提出 结构：感受器、转换器、 电子放大器。 分类：电化学免疫传感器、光学免疫传感器、压电免疫传感器和SPR型免疫传感器等。  2.电化学免疫传感器 是一种将电化学分析方法与免疫学技术相结合而发展出来的具有快速、灵敏、选择性高、操作简便等特点的生物传感器。 根据2001年ＩＵＰＡＣ的对生物传感器分类标准,电化学免疫传感器是基于抗原 抗体反应的,可进行特异性的定量或半定量分析的自给式的集成器件,其中抗原/抗体是分子识别元件,且与电化学传感元件直接接触,并通过传感元件把某种或者某类化学物质浓度信号转变为相应的电信号。 根据检测信号的不同,电化学免疫传感器可分为电位型、电流型、电导型和电容型。 2.1 电位型免疫传感器 2.1.1 直接型电位免疫传感器　 原理 利用抗原或抗体在水溶液中两性解离本身带电的特性,将其中一种固定在电极表面或膜上,当另一种与之结合形成抗原抗体复合物时,原有的膜电荷密度将发生改变,从而引起膜的Donnan 电位和离子迁移的变化,最终导致膜电位改变。 应用 早期的研究者利用此原理测定了人血清中的梅毒抗体、人血清白蛋白,并完成了血清鉴定 Yamamoto 等分别将HCG抗原或其抗体固定在钛金属电极表面,检测了HCG及其抗体 国内学者彭图治等分别报道了对人CA15－3、 AFP、IgG、HBsAg的直接检测.（彭图治，祝方猛等.测定甲胎蛋白的非标记电位型免疫传感器.应用化学，1998，01：47－49） 2.1.2　酶标记电位型免疫传感器　 将免疫化学的专一性和酶化学的灵敏性融为一体,对低含量物质的检测。 标记酶:辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶和脲酶。 酶标记传感器(电位型或电流型),最后均可归结为是对NADH、苯酚、O2 、H2O2 、NH3及新近开发的电活性物质的检出。 应用 Ghindilis报道了一种无介质反应体系。它用一种具有电催化活性的生物催化剂(如乳糖酶)来标记抗胰岛素抗体。与固定在电极上的胰岛素特异性结合，乳糖酶催化电极上氧的电还原反应，从而使电极上电位增加，其增加值与溶液中游离抗原(胰岛素)浓度有比例关系。检测胰岛素,获得了很宽的线性范围(300 mV) （Direct electron transfer catalyzed by enzymes : application for biosensor development[J ] .Biosens Bioelectron ,2000 ,28(2) :84－89） 发展 敏感膜如PVC 膜、醋酸纤维素膜、聚合物薄膜、蚕丝膜,以及固定化技术、膜电极制备技术的提高 离子选择电极( ISE）、pH 电极和气敏电极的发展 不足之处 较低的信号/ 噪声比; 线性范围窄; 与ISE（离子选择电极）相联系的免疫传感器不可避免地要受到其他离子的影响。 电流型免疫传感器 概念 在恒定电压的情况下监测由于抗原抗体结合或继后反应中电流的变化 分类 非酶标记电流型免疫传感器 酶标记电流型免疫传感器 　 2.2.1　非酶标记电流型免疫传感器 标记的电活性物质： Fe (CN) 6 3 -/ Fe (CN) 3 4 - 、二茂铬铁、Pb2+、Zn2+ 等． 主要是根据抗原和标记抗原对定量抗体进行竞争结合，而标记抗原与抗体结合后氧化或还原电流减少。 应用 二茂铁标记吗啡，以伏安免疫测定法，测定二茂铁—吗啡结合物在抗吗啡抗体的存在与不存在时的氧化作用，在抗体存在时，由二茂铁—吗啡结合物产生的氧化电流减少，这个结果构成对吗啡