透射电镜的其他制样技术PPT.ppt

第三节 负染色技术p142 又称为阴性反差染色。 原理： ·密度反差原理——某样品如果被密度比自身大2倍以上的物体浸没时，电镜下就形成强反差像 ·异常反差原理——由于静电场作用所形成的反差 特点：提高了标本的反差和分辨率 简便易行，不要求高纯度的样品 染色本身不改变生物标本的活性 应 用·大分子·细菌·病毒·原生动物·亚细胞碎片·分离的细胞器·蛋白质晶体的形状、大小及表面结构等特征 负染色技术常用染液 染液为重金属盐类，常用的有： ·1%~3%的磷钨酸钾、磷钨酸钠（ pH6.4~7.0 ） ·0.1%~1%的醋酸铀水溶液（ pH4.5） 常用方法： 现将要观察的生物样品制成适当浓度的悬液（105/ml），滴一滴在覆有Formvar膜或碳膜的铜网上，沉淀5~10min后用滤纸吸去多余液体。在铜网上液滴将干未干时将染色剂滴在铜网上，染色5~10min，滤纸吸干观察。 避免——标本凝集现象 生物标本凝集成团的原因：可能是由于标本表面张力、标本带电荷、支持膜的“疏水”作用及其制备的标本的质量、悬液的酸碱度等问题 解决办法：采用分散剂（BSA） 具体：在0.5ml样品内加入3~4滴0.005%~0.0