志鸿同步测控设计20152016学年人教版生物选修一课件53 血红蛋白的提取和分离PPT课件.pptx

课题3 血红蛋白的提取和分离三一二四三一二四三一二四三一二四三一二四三一二四三一二四三一二四探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二探究点一探究点二1 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 5学习目标思维脉络1.了解提取生物大分子的基本过程和方法。2.知道凝胶色谱法、电泳法等分离大分子技术的基本原理。3.掌握血红蛋白提取和分离的基本过程。4.能正确评价实验操作过程和结果。一、凝胶色谱法1.概念:也称作分配色谱法,是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。2.原理当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢,而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快,从而使相对分子质量不同的蛋白质分子得以分离。做一做1.根据对凝胶色谱的理解进行连线。2.凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是(　)A.根据蛋白质分子的大小B.根据蛋白质相对分子质量的大小C.根据蛋白质所带电荷的多少D.根据蛋白质溶解度的大小 解析:凝胶色谱所用的凝胶是一种微小的多孔球体,在小球内部有许多贯穿的通道,相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢;相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。答案:B二、缓冲溶液1.作用:在一定范围内,抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变。2.配制:由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成,通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到在不同pH范围内使用的缓冲液。判一判(1)缓冲溶液的成分是强酸和其相对应的盐。(　)提示:×　缓冲溶液是弱酸及其盐或弱碱及其盐的混合溶液。(2)缓冲溶液的作用是维持溶液的渗透压。(　)提示:×　缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH变化不大,起维持溶液酸碱度的作用。(3)加入过多的酸或碱溶液,缓冲溶液仍能起到缓冲作用。(　)提示:×　缓冲溶液中加入过多的酸或碱,则失去缓冲作用,因为缓冲溶液的缓冲作用是有一定限度的。3.电泳过程中,什么样的分子迁移速度最快?(　)A.纤维状、大分子B.纤维状、小分子C.球状、大分子D.球状、小分子解析:电泳就是利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同而分离各种分子的。一般来说,球形分子比纤维状分子易移动,小分子比大分子易移动。答案:D四、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。1.样品处理(1)红细胞的洗涤:目的是去除杂蛋白。采用低速短时间离心,吸走血浆后加生理盐水洗涤,直至上清液中没有黄色,表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋白的释放:在蒸馏水和甲苯的作用下,红细胞破裂,释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液:把混合液离心后,将试管中的液体用滤纸过滤,除去脂溶性沉淀层,于分液漏斗中静置片刻后,分离出下层的红色透明液体。(4)透析:透析袋能使小分子自由进出,而将大分子物质保留在袋内。2.凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的制作:准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱。(2)凝胶色谱柱的装填。(3)样品的加入和洗脱。其基本过程是调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。3.纯度鉴定:在鉴定的方法中,使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。4.操作提示(1)红细胞的洗涤:洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少,无法除去血浆蛋白;离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀,达不到分离效果。(2)色谱柱填料的处理:商品凝胶使用前需直接放在洗脱液中膨胀,可以将加入其中的湿凝胶用沸水浴加热,加速膨胀。(3)凝胶色谱柱的装填:在装填凝胶柱时,不能有气泡存在。因其能搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。(4)蛋白质的分离:如果红色区带均匀一致地移动,说明色谱柱制作成功。练一练1.透析袋一般是用硝酸纤维素制成的,其性质为(　)A.选择透过性膜B.半透膜C.全透膜D.生物膜解析:透析袋能使小分子自由通过,而将大分子保留在袋内,其只识别分子的大小,而不具备主动运输的功能,是半透膜。透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质或用于更换样品的缓冲液