第8章 第1节 基因诊断（3LMJ）PPT课件.ppt

PICS?Altra?II流式细胞仪(分析分选) * * * (七)DNA序列测定 该法是基因诊断所有的技术方法中最准确最可靠的—种。缺点：费时、费力、费用高。 * * 二、基因诊断的主要技术方法 * (一)点突变的检测 三、常见的基因异常及其检测 (二)大片段核苷酸丢失或插入的检测 (三)基因重排的检测 (四)基因扩增的检测 (五)DNA多态性的检测 (六)基因表达异常的检测 (七)病原体基因的检测 * * * (一)点突变的检测 狭义的点突变指碱基替代，分为单点突变和多点突变；广义的点突变还包括少数核苷酸的缺失或插入。 1.已知点突变的检测 突变位点已被阐明的遗传病，可采用PCR等位基因特异性寡核苷酸杂交(PCR/AS0H)检测。 * * 三、常见的基因异常及其检测 * PCR/AS0H 检测: (1)根据突变点上下游的序列设计合成引物，PCR 扩增出突变区的DNA片段。 (2) 将PCR产物用斑点或狭缝点样器点在尼龙膜上，以紫外线照射固定。 (3) 针对上述每种突变位点，分别合成 2个寡核苷酸探针；其中一个具有正常的碱基序列，另一个则具有突变的碱基序列。 (4)分别预杂交、杂交、洗膜、放射自显影或显色。 (5) 分析正常探针及突变探针分别杂交得到的显影或显色图谱，即可作出基因诊断 * * N：正常基因；H：杂合子基因；M：突变基因 ASO1 ASO2 N H M (PCR/AS0H 检测示意图) * * 2.未知点突变的检测 初筛：PCR-SSCP分析法 确认：DNA sequencing。 * * PCR-SSCP: 广泛用于大批样品基因突变的检测(初筛)。 * * 3. 少数核苷酸缺失或插入的检测 可供选择的方法：PCR-RFLP分析、AS-PCR、PCR-SSCP及DNA测序等 * 镰形细胞贫血 原因：β-珠蛋白链第 6位密码子GAG→GTG，造 成Glu→Val所致。 方法：设计一对引物PCR扩增可得294bp，Oxa NI 消化，电泳。 294 191 103 bp A A：正常人 B B：纯合子病人 C C：杂合子病人 结果： * * 第八章 基因诊断与基因治疗 基因诊断（gene diagnosis）： ——从基因水平探测和分析疾病的起因。 基因治疗（gene therapy）： ——从基因水平干涉和矫正疾病造成的紊乱。 * 多数非感染性疾病发生的根本原因是基因结构的变异或表达水平的异常；感染性疾病则是病原体入侵在体内表达外源性基因所致。 授课老师：江黎明 * * * 一、基因诊断的概念和特点 二、基因诊断的主要技术方法 三、常见的基因异常及其检测 四、疾病的基因诊断(自习) 五、基因诊断在法医学上的应用 第一节 基因诊断 (gene diagnosis) * * 基因诊断通常是指利用分子生物学的方法技术，直接检测体内DNA的结构变异或RNA的水平变化，从而对疾病作出诊断的方法。 一 、基因诊断的概念和特点 （一）概念 适用于遗传性疾病、感染性疾病、肿瘤等多种疾病的诊断，以及个体识别和亲子鉴定等法病学领域。 * * （二）特点--以已知基因作为检测对象 （l）特异性强：直接检测导致疾病发生的基因变化； （2）灵敏度高：所采用的分子杂交和聚合酶链反应 等技术都具有信号放大作用； （3）取样便利：一般不受组织或时相的限制； （4）早期诊断：易在疾病尚无临床表现时作出诊断； （5）应用广泛：可检测自体基因和外源基因。 * 一 、基因诊断的概念和特点 (一)核酸分子杂交（NA hybridization） (二)聚合酶链式反应（PCR）技术 (三)单链构象多态性分析（SSCP） (四)DNA分子多态性（DNA polymorphism）分析 (五)限制性片段长度多态性（RFLP）分析 (六)显微切割（microdissection）技术 * (七)DNA序列测定（DNA sequencing） 二、基因诊断的主要技术方法 * * * (一)核酸分子杂交 4.DNA 芯片(DNA chip)技术 Southern/DNA印迹、Northern/RNA印迹 (第七/六章)和Western/蛋白质印迹(第九/二章) 其他杂交方法: 1.斑点印迹(dot blotting)与狭缝杂交 2. 组织原位杂交(tissure in situ hybridization ) 3. 等位基因特异性寡核苷酸杂交 (allele-specific oligonucleotide hyb