01.大一组胚课程课件---绪论PPT.ppt

Good afternoon;Histology and Embryology 组织与胚胎学;组织学研究内容和意义 组织学研究方法和技术 组织学的学习方法;一、概述;Organ;胚胎学：研究人体发生、发育过程及相 关规律的科学 2.组织胚胎学与其他学科间的关系 生理学 病理学 妇产科学 外科学;显微镜的发明于16世纪末的荷兰。 1665年Hooke提出“细胞”，开创了用显微镜研究生物构造的先河。; ;(一)普通光镜组织标本的制备方法 1. 石蜡切片术(paraffin sectioning) 取材、固定→脱水、包埋→切片、染色→封片; 目的:使组织切片着色,便于观察. 常用HE染色 苏木精(hematoxylin):碱性染料 染细胞核及细胞质内核糖体 成紫兰色。 伊 红(eosin):酸性染料 染细胞质及胶原纤维成粉红色;染色;嗜碱性(basophilia ):易被碱性染料着色 嗜酸性(asidophilia):易被酸??染料着色 中 性(neutrophilia):与两种染料的亲和力 都不强。 亲银性，嗜银性：银染Silver staining 异染性：甲苯氨蓝染色;2、其他组织切片的制作方法; 骨磨片 bone ground section silver stain;(二)光学显微镜术;2.特殊显微镜;（2）相差显微镜(phase contrast microscope) 观察体外培养的活细胞形态结构;（3）激光共聚焦显微镜: (Confocal laser scanning microscope); 1932年Ruska;Knoll发明了电子显微镜（electron microscope)，使观察工具的分辨率由0.2μm提高到0.2nm. 1.透射电镜-transmission electron microscope TEM 分辩率为0.2nm 固定——→包埋——→切片——→染色 戊二醛、 树脂包埋 超薄切片 醋酸铀 锇酸双重固定 （50—80nm 厚） 柠檬酸铅2.扫描电镜 (scanning electron microscope SEM);图;电镜图;电镜扫描图;(四)组织化学(histochemistry)  与细胞化学(cytochemistry); 1.一般组织化学 在切片上加某种试剂，与组织中的待检物质发生化学反应，在原位形成有色沉淀物。 例：显示糖原或蛋白多糖的 过碘酸--雪夫氏反应(PAS反应) （periodic acid Schiff reaction) 多 糖 + HIO4→多醛 + Schiff试剂 （乙二醇基) (乙二醛基） 紫红色沉淀物 ;猫小肠上皮的PAS 染色;脂类:冰冻切片---油红O等染色 电镜制片----锇酸染色 核酸:福尔根 （Fuelgen） 反应---DNA 或甲绿-派若宁—DNA,RNA. 酶类:酶作用于底物→初级反应物 ↑ 有色沉淀 捕获剂;免疫组织化学（辣根过氧化物酶标记） 胰岛B细胞呈胰岛素阳性;(immunocytochemistry）;人或动物的肽、蛋白质（抗原）;酶标抗体;;抗原;亲和素-生物素-过氧化物酶 复合物法(ABC法);酶;+;图11 免疫组织化学（荧光素标记） 毛细血管内皮细胞呈vWF阳性 ;　——核酸分子杂交技术 是通过检测细胞内基因(DNA)的有无,及在转录水平检测基因的活性(mRNA),原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达. 利用带有标记物的已知硷基顺序的核酸探针与细胞内待测的核酸按硷基配对的原则进行特异性原位结合—杂交;原位杂交示脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性; 4.凝集素组织化学 利用凝集素可特异性与细胞表面寡糖和糖链识别和结合的原理,对这些糖链进行定位. (1)荧光标记凝集