酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定百替生物.pdf

实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无 性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂 殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来 观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染 色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型 变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美 蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死 细胞和活细胞。 三、实验器材 1.材料：酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母 (Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。 2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。 3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。 四、实验步骤 1.美蓝浸片观察 （1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少 量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。 注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。 （2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在 菌液上。 注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。 （3）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情 况，并根据颜色来区别死活细胞。 （4）染色约0.5h 后再次观察，注意死细胞数量是否增加。 service@100 2.水-碘浸片观察 在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3 小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中 混匀，盖上盖玻片后镜检。 五、实验报告 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征 六、思考题 1.吕氏碱性美蓝染液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原 因。 2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？ 实验八 细菌细胞的生化反应实验 service@100 一、实验目的 1.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 2.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 二、实验原理 各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相 同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。 糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。不同的细菌在糖的分解能力上存 在很大的差异。有些细菌能分解某种糖并产生酸性物质(如乳酸、丙酸、醋酸等)和气体(如 二氧化碳、氢、甲烷等)，而有些细菌只产生酸不产生气体。例如大肠杆菌分解乳糖和葡 萄糖产酸并产气，普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。酸的产生可利用 指示剂来判断。在培养基中加入溴甲酚紫(pH5．2 为黄色，pH6.8 为紫色)，当发酵产酸时， 使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵试管中倒置的德汉氏小管中有无气泡的出 现来验证。 三、实验器材 1.材料：大肠杆菌、普通变性杆菌、产气杆菌、糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡 萄糖蛋白胨水培养基。 2.试剂：甲基红试剂、40％KOH、5％a 一萘酚、乙醚、吲哚试剂。 3.实验器材：德汉氏小管、试管、接种环、恒温培养箱。 四、实验步骤 1.用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称和所接种的细菌菌名。 2.取不同的培养基，分别接入菌种，留一只作为空白对照。 注：在接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。 3.将接种过和做对照的试管均置37℃培养24-48h。 4.观察各试管颜色变化及德汉式小管中有无气泡。 五、实验报告 将结果填入下表。“+”表示产酸或