刘大卫CrisprCas3.7技术新突破解读.pptVIP

通过SpCas9或xCas93.7在具有基因组整合的GFP报道基因的HEK293GFP人胚肾细胞细胞中的基因组DNA切割。5天后，通过流式细胞仪分析细胞的GFP荧光损失 * * * * * 单碱基编辑的适用范围也大大增加 * * 脱靶效应考察 * * Summary 人类基因组编辑技术的发展日新月异，新的方法和工具层出不穷。新发现的xCas9 3.7活性、保真性、PAM序列灵活性三者同时表现优秀，使xCas9 3.7（由SpCas9进化而来）的出现犹如利刃出鞘，将会极大地促进基因组编辑领域的进程。 PACE噬菌体辅助连续进化器是一个高效的变异体发生筛选体系，这也是Cas酶筛选的一大利器。 长江后浪推前浪，浮事新人换旧人，虽然xCas9 3.7的发现将让人类具有更加“锋利”和“通用性更强”的基因组编辑剪刀，但是它可能仍然无法做到基因组工具中“一统天下”，新的工具仍然需要研发和优化，未来的人类生活一定是更加光明！ * * * * * * * * * * * * * 在PAM识别中具有关键作 * * 该PAM耗竭测定显示xCas9-3.0-xCas9-3.3和xCas9-3.5-xCas9-3.9用NG，NNG，GAA，GAT和CAA PAM切割DNA位点。与起始文库相比，PAM消耗得分最高的克隆xCas9-3.7消耗了NG，NNG，GAA，GAT和CAA PAM至少100倍，并且x