人胚胎干细胞研究进展PPT.pptVIP

人胚胎干细胞研究进展; 干细胞的基本概念 胚胎干细胞系的建立过程 胚胎干细胞研究的进展情况 胚胎干细胞的研究意义 胚胎干细胞研究的困难及解决办法; 人体发生过程： 受精 卵裂 受精后72h 受精后5-7天 精子+卵子 合子 卵裂球 桑椹胚 囊胚 滋养层?胎盘及胎儿附属结构 囊胚 内胚层?消化道、呼吸道上皮和腺体；肝；胆；胰。 内细胞群 中胚层?结缔组织；血液；肌肉；骨骼；泌尿生殖系统 外胚层?体表结构；神经系统;;;干细胞的基本概念;;横向分化： 　　部分干细胞在特定条件下可以转化为其它细胞，如肌肉干细胞在特定条件下可以分化为各种血细胞系。;衍生自囊胚的内细胞团或原始外胚层的细胞； 永生化(immortal)； 能维持稳定的正常的二倍体染色体结构； 有稳定的发育潜能，能被诱导增殖或分化； 能参与胎儿所有组织的发育过程； ;胚胎干细胞系的建立过程;;1、干细胞来源： (1) 发育良好的囊胚，从中分离内细胞群细胞?ES细胞 (2) 从5-9周的胚胎生殖腺中分离出人的EG细胞（embryonic germinate cells） (3)恶性胚胎肿瘤或畸胎瘤细胞 （embryonal carcinoma, EC) (4) 生殖克隆（治疗性克隆）：体细胞核转移（SCNT） 　　去核卵细胞 + 体细胞核 ?克隆 ?囊胚 ?分离内细胞群 ?ES细胞 ;;;2、胚胎干细胞的分离 酶消化后培养 免疫方法去处滋养层细胞 流式细胞仪分离法;3、培养条件： (1) 特殊的培养液：用DMEM培养液，其中胎牛血清的浓度和质量很重要，还要加非必须氨基酸；β-巯基乙醇。 (2) 以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞。 (3) 必须加入LIF，抑制细胞分化。;4、胚胎干细胞的鉴别 　　胚胎干细胞具有以下特点： (1) 细胞内碱性磷酸酶活性高 (2)端粒酶活性高 (3) 不被Hoechst33342 和Rhodamine123染色 (4) 细胞膜表面有特殊的标记：SSEA-3, SSEA-4, 　 TRA-1-60, TRA-1-81 (5) 能分化成三个胚层的细胞，将胚胎干细胞植 　 入免疫缺陷小鼠皮下可产生畸胎瘤 (6) 可诱导分化为各种成体干细胞;;;;;干细胞特性;;干细胞??导分化的常用方法 （1）加入诱导细胞分化的因子或化学物质， 如VGEF、bFGF 、DMSO和RA等 （2）将ES细胞与特定的细胞共培养 （3）将某种分化诱导因子的基因转入ES细 胞内 ;鉴定干细胞的常用方法： （1） 细胞形态与结构 （2）细胞功能 （3）细胞表面的特殊标志 （4）细胞内特异基因的表达;造血干细胞的鉴定： （1） 细胞形态 ：集落呈非贴壁生长，细胞形态较小 （2）细胞表面标志：flk-1（Fetal Liver Kinase 1); L/TAL-1； CD34；GATA-1； （3）基因表达：TAL-1；GATA-2 ；βH1；β主要珠蛋白 ; 内皮细胞 : （1）细胞形态：扁平贴壁状态 ；Weibel-Palade小体；广泛胞内连接；大量吞饮泡 （2）细胞标志：血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1或CD31；细胞粘附分子整合素αvβ3 ；CD34 ；JAM(Junctional Adhesion Membrane) ；MECA-32以及MEC-14，7抗原 （3）特异基因表达：flk-1；flt-1 ；tie-2 ;心肌干细胞： （1）细胞结构：细胞内含糖原颗粒，大量线粒体以及广泛的未形成成熟肌原纤维的粗丝和细丝 （2）细胞功能：节律性收缩 ；心肌特异离子流。利用膜片钳技术可检测L型Ica，Ina，Ito，Ik，Ik1，Ik，ACH和If （3）基因表达：α及β心肌球蛋白重链 ; 神经干细胞 : （1）细胞形态：胞体很小，从胞体伸出许多长的神经突 （2）细胞功能：电压控制性Na+，K+，Ca2+通道；神经递质的受体 （3）细胞标志：TH（酪氨酸羟化酶），微管相关蛋白tau，MAP2，β微管蛋白3（TuJ-1），GFAP（胶质原纤维酸性蛋白），巢蛋白，突触泡蛋白以及NF-L（68KDa的神