最详细CRISPRCas9系统原理应用及发展课件.pptVIP

3.2 sg-RNA：Cas介导基因修饰 * 中山大学生命科学学院 CRISPR-Cas9系统基因修饰理论与实战 1 基因表达研究方法 干扰基因表达（过表达或低表达），或者表达突变体并检测其相关生理功能，是基因功能研究中最重要的方式之一； 基因表达技术- 质粒转染，病毒转染等传统方法得到广泛运用，但同时其也存在缺点； 1 基因修饰的方法与各自优势 质粒- 瞬时转染 - 某些细胞效率偏低 - 表达结果不稳定，有内源表达的干扰； 质粒- 稳定细胞 - 表达结果不稳定，筛选效率不高，在重组插入基因组中可能干扰其它基因表达； 病毒- 瞬时感染 - 表达结果不稳定，质粒容易在细胞复制过程中丢失，随机插入基因组中可能会干扰其它基因表达； 新一代的基因编辑技术- 利用重组酶在基因组水平修饰基因，产生的遗传性质稳定，直接作用于内源，减少表达干扰，目前有成熟的技术如CRISPR/Cas9； DNA NHEJ and HDR DNA sequence disrupted NHEJ: Non-homologous end joining +donor DNA DNA sequence replaced HDR: homology directed repair DNA修复的机制与基因编辑原理 非同源性末端接合修复机制(Non-homologous end joining, NHEJ) 同源介导的