医院感染病原微生物鉴定及其耐药机制检测PPT.ppt

医院感染病原微生物鉴定及其耐药机制检测;一、医院感染;2、病原学 细菌为最常见的病原体，细菌的种类与分布因感染类型、医院类别、患者基础疾病和治疗措施不同各异。目前，以革兰阴性杆菌为主(如肠杆菌科和非发酵菌)，近十余年来抗生素大量应用，常见耐甲氧西林葡萄球菌医院感染，留置导尿、人工心脏瓣膜等的医院感染中凝固酶阴性葡萄球菌感染率上升，手术切口和尿路肠球菌感染也不少见。厌氧菌和深部真菌作为机体正常菌群常引起内源性感染，如腹腔、盆腔感染、菌血症等。;3、感染源 引起医院感染的病原体来源于住院病人、医务人员、探视者、陪护人员，来自于医院环境及未彻底消毒灭菌的医疗器械、血液制品的污染菌等，大多为条件性致病菌，且有程度不同的耐药性。 4、易感人群 免疫力低下状态的住院患者成为感染的易感人群，同时住院期间接受不同种类药物治疗和某些治疗措施为病原体感染创造了入侵和繁殖条件。 ;二、医院感染病原体的确定 ;3、耐药表型的检测： 医院内感染菌常常是一些耐药菌，实验室应对这些细菌的耐药表型进行检测。肠杆菌科（大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、变形杆菌）应作超广谱β内酰胺酶（ESBLs）、耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）、耐糖肽类抗生素的肠球菌（VRE）。 ;4、医院内感染的分子生物学检测 ： （1）多位点酶电泳（multi locus enzyme electrophoresis, MLEE） 将菌株培养物破碎，离心取上清液，在淀粉胶上进行电泳，电泳完成后将胶切成小条，分别与不同的酶底物作用进行酶染色，不同的酶分子在不同的电泳位置显影，组成了菌株的电泳型。当酶分子的基因发生一个或多个位点变异时，电泳迁移率相应发生变化。 ;（2）限制性片段长度多态性分析（restriction fragment length polymorphism, RFLP） 将菌株培养物破碎，提取DNA，以限制性内切酶进行切割后，在琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳后作溴乙啶染色，通过分析电泳区带图谱对菌株进行鉴别；可以将电泳分离的核酸片段转印到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，用标记的探针与之杂交，用于菌株的鉴别。 ;（3）多态DNA的随机放大(random amplification of polymorphic DNA,RAPD) 多态DNA的随机放大又称随机引物PCR，在菌株的DNA提取物中加入约10个碱基的随机引物，进行PCR扩增，然后将PCR产物进行电泳和溴乙啶染色，分析染色图谱可用于菌株的鉴别。 ;（4）脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis, PFGE） 将菌体包埋于琼脂中，先后用酶破坏细胞壁和分解蛋白质，以切点较少的内切酶剪切细菌的DNA，以随时变更电场方向的电泳装置对大片段DNA进行电泳，根据电泳图谱对菌株进行识别。 ;（5）放大片段长度的多态性分析（amplified fragment length polymorphism, AFLP） 对菌株的DNA进行限制性酶切，然后用特定的引物从限制性片段中将相应的片段选出，经PCR扩增后再进行电泳分析。 （6）核酸序列分析(nucleotide sequence analysis) 用PCR的方法将菌株DNA的某一片段进行扩增放大，然后进行测序，对各分离菌株的序列进行比较。 ;三、药敏试验;例如对于肠杆菌科细菌常规报告的抗生素有氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻吩、庆大霉素；选择报告的抗生素有阿米卡星、阿莫西林/棒酸或氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/棒酸、头孢孟多或头孢尼西或头孢呋辛、头孢吡肟、头孢美唑、头孢哌酮、头孢替坦、头孢西丁、头孢噻肟或头孢唑肟或头孢曲松、环丙沙星或左氧氟沙星、亚胺培南或美罗培南、美洛西林或哌拉西林、替卡西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑。; 对于铜绿假单胞菌和不动杆菌常规报告的抗生素有头孢他啶、庆大霉素、美洛西林或替卡西林、哌拉西林，选择报告的抗生素有阿米卡星、氨曲南、头孢哌酮、头孢吡肟、环丙沙星、亚胺培南或美罗培南、妥布霉素。;对于葡萄球菌常规报告的抗生素有苯唑青霉素、青霉素，选择报告的抗生素有阿奇霉素或克拉霉素或红霉素、克林霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、万古霉素。 对于肠球菌常规报告的抗生素有青霉素/氨苄西林 ，选择报告的抗生素有万古霉素 。;对于嗜血杆菌常规报告的抗生素有氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑，选择报告的抗生素有头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟或头孢曲松、头孢呋辛钠（针剂）、氯霉素、美罗培南。;对于肺炎链球菌常规报告的抗生素有红霉素、青霉素（苯唑青霉素）、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑，选择报告的抗生素有格帕沙星、左氧氟沙星或司氟沙星、氧氟沙星、四环素、万古霉素。;对于除肺