塞来昔布和糖尿病大鼠脑缺血再灌注..ppt

塞来昔布对糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织NF-κB和COX-2表达的影响 Effects of celecoxib on the expression of NF-κB and COX-2 in diabetic rats with focal cerebral ischemia-reperfusion 汇报内容 一 引言 二 材料与方法 三 结果 四 讨论 五 结论 六 致谢 引 言 流行病学调查 脑卒中是导致死亡的第二大类疾病，平均每15秒钟就有一个脑卒中新发病例,每21秒就有一人死于脑卒中。每年死于脑卒中人数约150万。缺血性脑卒中约占脑卒中总发病率的70%～80% 发病率呈逐年上升趋势 多合并糖尿病、高血压、 高血脂等 研究现状 脑缺血引起的炎症反应 是以脑微血管中白细胞聚集并穿过血管壁、浸润脑组织、同时伴有微血管功能紊乱及局部脑组织中液体及蛋白质积聚为标志的急性炎症反应过程。其与脑缺血后的继发脑损伤密切相关。 其中, 环氧合酶和核因子κB被认为是在神经系统的炎症反应中发挥着枢纽性作用的关键因子。 有关于环氧合酶 一、环氧合酶的作用 二、COX的亚型及作用 COX-1 诱导产生前列腺素发挥多种生理功 能，如保护胃肠粘膜、支持肾脏中 的微循环等 COX-2 正常情况下的表达 脑缺血后脑组织中COX-2的表达 昔布类高选择性环氧化酶- 2 抑制剂 临床应用方面 对脑血管和神经方面的作用处于实验阶段 塞来昔布不会导致缺血事件的增多。 COX-2抑制剂所致的心血管缺血事件发生率是随着每日剂量的增加和应用时间的延长而增加的。 研究的意义 脑梗死患者合并糖尿病为临床所常见，糖尿病不仅是脑梗死最常见的危险因素之一，且在脑梗死发作时可明显加重脑损伤 本研究用小剂量链脲佐菌素腹腔注射SD大鼠，长期饲养，制作与人类相仿的慢性2型糖尿病模型，利用塞来昔布干预糖尿病大鼠脑缺血-再灌注模型，探索其作用机制，拟为临床上的脑保护治疗寻求理论依据。 实验动物 清洁级SD大鼠150只，体重180-200g，购自第三军医大学大坪医院试验动物中心 许可证号： SCXK-2007017 主要试剂 主要仪器 日本尼康光学显微镜 微量电子天平 电动恒温水浴箱 Leica细胞图像分析仪 3脑缺血模型的制备 给药方法 不给药 缺血-再灌注后30分钟后给予2ml生理盐水灌胃一次，12h组大鼠在手术后8h再灌胃2ml生理盐水一次,24h、48h组大鼠按每日2次灌胃，最后一次灌胃在取标本前4h 以塞来昔布15mg/kg 和 25mg/kg剂量制成混悬液约2ml灌胃,灌胃时间和NS组相同 脑缺血模型评分标准 0分：无神经系统症状与体征 1分：出现同侧Homer征，右侧前爪不能完全 2分：行走时向右侧画圈(追尾现象) 3分：站立时向右侧倾倒，不能行走或打滚 4分: 无自发活动，有意识障碍 1-3分为模型制备成功。 标本的制备 检测 免疫组化法检测各组大鼠缺血侧梗死灶周围皮质中NF-κB和COX-2的动态表达 表1 各组神经功能缺损评分(x±s , n=5) COX-2的表达 脑组织COX-2表达 NF-kB的表达 LCIR组NF-KB免疫组化染色（×400） 表1 各组大鼠不同时间点脑组织NF-kB表达阳性率 （%） 表1 各组大鼠不同时间点脑组织NF-KB表达阳性率（%） NF-kB和COX-2表达趋势图 本次试验 本实验中发现COX-2在dIR组大鼠的各个时间点皆有表达，全脑均有散在表达，在梗死边缘形态尚正常和已经有形态改变的神经元中表达最强烈，缺血中心区也见表达，以12h表达最强烈，其次24h,48h,6h.较之以前研究，表达高峰提前, 再次证实了糖尿病加重脑缺血再灌注的损伤。 本次试验 大鼠脑缺血后各时间点均可见NF-KBp65免疫阳性细胞分布在缺血区的胞核和胞浆,遍及纹状体和大脑皮质缺血区，主要位于脑缺血梗死区边缘的半暗带，以12h表达最高，其次为24h,48h,6h.表达高峰较无糖尿病大鼠提前，从而表明糖尿病增强NF-KB的激活可加重脑缺血损伤。 糖尿病加重脑损伤 塞来昔布的作用 可能的机制 塞来昔布对NF-κB的抑制机制可能与阿司匹林不同,不影响IκB-α表达及磷酸化降解。推测该作用不依赖COX酶活性，可能通过抑制某种促进RelA/p65转运的蛋白而阻碍了其核移位，而抑制了NF-κB活性。 可能COX-2的表达被抑制后，COX-2及其反应产物对NF