基因诊断2010【精美医学课件资料】.ppt

（四）动态突变的诊断 动态突变:邻近基因或位于基因序列中的三核苷酸重复拷贝数，如(CGG)n、(CAG)n等，在一代代传递过程中会发生明显的增加，从而导致某些遗传病的发病。该突变可遗传并产生表型效应，多为神经系统疾病。代表疾病：Hutington舞蹈病(CAG)n、强直性肌营养不良，脆性X综合征(CCG)n。 方法：可直接通过PCR扩增来诊断 。以致病靶位点的STR及其周围序列为模板，设计合成一对针对STR两侧翼的寡核苷酸引物，经PCR扩增后，PAGE电泳检测扩增片段的长度进行诊断。 脆性Ｘ综合征：FMR1 基因5’ 非翻译区遗传不稳定的（ CGG ） n 三核苷酸重复序列。正常人:n=6~50 ；前突变：50~200 copies ； 全突变：200~1000copies。 随着世代传递长度增加，发病年龄提前，病情加重。 第三节 基因诊断的应用 一、遗传性疾病的基因诊断 1．直接诊断策略：采用基因突变检测的方法，通过PCR或核酸分子杂交技术直接检测导致遗传性疾病发生的多种基因突变。 2．间接诊断策略：采用多态性连锁分析法，寻找具有基因缺陷的染色体，并判断被检者是否具有这条染色体。 二、感染性疾病的基因诊断 每种病原体都有其特定的基因，对这些基因的组织结构的深入研究为感染性疾病的基因诊断提供了有利条件。 　采用核酸分子杂交技术，针对病原体特异的核苷酸序列设计探针来进行杂交；或应用PCR技术扩增病原体基因的保守序列；或将核酸分子杂交技术与PCR技术联合应用，能够对大多数感染性疾病作出明确的病原体诊断，而且能诊断出带菌者和潜在性感染，并能对病原体进行分类、分型鉴定。 到目前为止，已有几十种感染性疾病可开展基因检测，主要包括： 1．? 病毒：HIV、HBV、HCV、腺病毒、EB病毒、脊髓灰质炎病毒疱疹病毒等。 2．? 细菌：大肠杆菌、霍乱弧菌、结核杆菌、绿脓杆菌、沙眼衣原体、肺炎支原体 3．? 寄生虫：恶性疟原虫、血吸虫等。 4．? 真菌：曲霉素、白色念珠菌等。 三、肿瘤的基因诊断 肿瘤的产生常常涉及多个基因的变化，这就为肿瘤的特异性分子诊断的临床应用带来了困难，因此肿瘤基因诊断不如遗传性疾病、感染性疾病的分子诊断开展的普遍，但随着近年来分子生物学理论及技术的发展，临床诊断工作也在逐步进行，可采用以下策略： 1．检测肿瘤相关基因 如癌基因、抑癌基因、肿瘤转移基因、肿瘤转移抑制基因等基因突变及表达异常。可应用基因突变及表达异常的检测方法。 2．检测肿瘤特异性基因（标志物基因）或mRNA 肝癌—甲胎蛋白（AFP），结肠癌—癌胚抗原（CEA） 3．检测肿瘤相关病毒的基因 鼻咽癌—EB，宫颈癌—HPV 四、产前基因诊断 基因诊断不仅可以对各种遗传性疾病进行诊断，而且还可以对胎儿进行遗传性疾病的产前诊断，尤其是当前大多数遗传性疾病其临床表现特征及生化异常尚不清楚，又还没有很好的治疗方法，诊断就显得特别重要。 传统的产前诊断是检查孕妇绒毛细胞或羊水细胞核型或酶活力，但灵敏度不高，许多疾病无法诊断。 现从绒毛细胞、羊水细胞或胎儿脐血中抽提DNA，进行PCR或核酸分子杂交分析，从中提出的DNA产量多且纯度好，容易得到满意的结果。 五、基因诊断在法医学中的应用 （一）DNA 指纹 针对重复序列（小卫星DNA、微卫星DNA），人工合成寡核苷酸片段作为探针，与经过酶切的人基因组DNA进行Southern印迹杂交，可以得到大小不等的杂交带，而且杂交带的数目和分子量大小具有个体特异性，就像人的指纹一样，因而把这种杂交带图谱称为DNA指纹或基因指纹（gene finger-printing）。 DNA指纹具有高度的特异性、遗传稳定性、体细胞稳定性的特征，由于其可同时探测十几个、甚至更多个位点的变异，因而能反映基因组的特异性。因此DNA指纹可作为法医学鉴定的有力依据。 （二）法医学鉴定 1．个人识别 在同一张Southern印迹杂交图上对现场材料（如一根毛发、单个精斑、一滴血、少许唾液等）的DNA指纹和嫌犯的DNA指纹进行对比，确定二者的相关性。若条带完全一致，则为同一个个体。 2．亲子鉴定 同时分析父母与子女的DNA指纹。 DNA指纹分析用于个体鉴定 * DXS52位点的微卫星DNA与Xq28位点紧密连锁，甲型血友病的基因位点也在此区域，因此可以通过DXS52间接诊断血友病。 DXS52在群体中的类型： 0.7，1.3，1.39，1.57，1.63，1.69，2.1，2.4kb。 引物序列： 5’-GGCATGCATCACTTCTCTCATGTT 5’-