实验十二 平板菌落计数PPT.pptVIP

实验十二平板菌落计数法 目的要求 掌握平板菌落计数的基本原理和方法； 学习并巩固倒平板及稀释过程中的无菌操作技术。 基本原理 平板菌落计数法是将一定量的含菌样品用无菌水经一系列梯度稀释后与培养基混合制成平板，样品中所含的单细胞微生物（菌体、芽孢、孢子）各自被分散固定在平板的不同位置上，经培养后，每个具有生命力的细胞均可繁殖成一个肉眼可见的菌落。因此，通过平板上的菌落计数就可推算出样品中活菌含量的多少。故平板菌落计数法又称活菌计数法。 1、梯度稀释 3、菌落计数 计数时一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度最为合适。同一稀释度的3个重复的菌数不能相差太悬殊。由10-4、10-5、10-6稀释度计算出的总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。另外，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以3个稀释度中第二个稀释度倒平板，所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 活菌数/ml＝同一稀释度3次重复菌落平均数×稀释倍数×5 实验器材 活材料：变形杆菌悬液； 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基； 器材：无菌培养皿，移液器，试管架，盛有4.5ml无菌水的试管，记号笔，酒精灯，火柴，恒温培养箱。 实验步骤 1、编号 取无菌培养皿6套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各2套。另取6支盛有4.5ml无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、 10-4、10-5、10-6 。 2、稀释 用移液器精确吸取0.5ml变形杆菌悬液放入10-1标号的试管中，换1支枪头插入该管液体中反复吹吸3次，使其混合均匀，然后再准确吸取0.5ml移入10-2标号的试管中，混合均匀……依次类推。 3、加样 取1支无菌枪头，用移液器分别从10-6 、10-5、 10-4管中吸取菌液各0.2ml，对号放入编号的无菌培养皿中。 4、倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入熔化后冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约10～15ml，置水平位置，迅速摇匀。 5、培养 待凝固后，倒置于37℃恒温箱中培养。 6、计数 培养24小时后计数，左手拿培养皿，右手拿笔，点数每皿中的菌落数，并作好记录。 下次实验自带镊子 注意事项 稀释菌液与取样时，每支移液管只能用于一个稀释度； 倾注平板时的培养基温度要合适； 混匀样品时，注意勿用力过猛，以免培养基与含菌混合液溅到培养皿盖与皿壁上； 样品要充分混匀，操作熟练快速（15－20min完成），严格无菌操作，尽量减小操作误差； 该法适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物。 移液器的使用；培养皿拿法。 清理工作。 实验报告 请将计数结果记录于下表中。 稀释度 10-4 10-5 10-6 菌落数 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 活菌数/ml 思考题 根据你的实验体会，请说说如何才能减少平板菌落计数的误差？