孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B活性.docxVIP

孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B3活性作者：罗振宇，陈薪研，王小燕，瞿畅，张美英，安卫征，熊盛?【摘要】?目的从绿藻孔石莼中分离胯具有抗病毒活性蛋白多糖提取物。方法新蝓鲜孔石莼经pH的磷酸盐缓冲液提取和硫九酸铵沉淀得到粗提取物，大孔树脂层析分牝离得到蛋白多糖。经紫外扫描、高温高压峄处理和糖苷酶水解测定提取物的性质。MTT法检测蛋白多糖对Hela细胞的毒砧性，细胞病变法检测蛋白对柯萨奇病毒B孟3引起的细胞病变抑制作用。通过样品对细胞的保护作用、对CVB3增殖的影响次、对CVB3感染细胞的综合作用，初步攮研究了样品抗病毒作用的机理。结果从孔栏石莼中提取了蛋白多糖，得率为%。毒性い试验结果表明，孔石莼蛋白多糖对HeL氕a细胞的半数中毒浓度TC50大于8m濂g·ml-1。孔石莼蛋白多糖具有显著渠的抗CVB3活性，通过试验测得孔石莼阶蛋白多糖对CVB3主要是预防作用和直２接杀灭作用，其IC50为μg·ml-车1。结论从孔石莼中分离到具有抗病毒活溺性的蛋白多糖，具有很好的抗CVB3活篚性。【关键词】?孔石莼；提取；纯化虢；孔石莼蛋白多糖；抗病毒活性；CVB缒3Abstract：Objecti前veToisolateantivir鬏usproteoglycanfromちthegreenalgae,Ulva淮pertusa.MethodsFre桉shUlvapertusawasex誊tractedbyphosphate拼buffer,andthetotal睁protEinwasprecipit否atedwithammoniumsu练lfateandthenpurifi侈edbymacroporousres蕻in.Thetoxicityandantiviralbioactivit镏ywereevaluatedbycy瘥topathiceffect(CPE诫)andMTTcolorimetri裁cassay.ResultsTheT┇C50(50%toxicityconＢcentration)ofprote倍oglycanpurifiedfromUlvalactucaL.ismo聆rethan8000μg·ml–1?轴andtheIC50((50%inh黢ibitoryconcentrati¨on)inhibitoryconce惚ntration)wasμg·ml–ひ1，TIwas2antiviralp微rotEInsfromtheUlva凹lactucaL.?exhibits呤potentanti-CVB3act顶ivityinvitro.Keyw蛄ords：UlvalactucaL.琪；?Extract;?Purify;钙?Antiviraleffect;毛?Proteoglycanfrom跃UlvalactucaL;??CoxsackievirusB3(CVB3)柯萨奇病毒B(coxsackie闭virusB，CVB)属小核糖核酸科睥肠道病毒属，是引起病毒性心肌炎最主要的病原体，其中以CVB3对心肌的亲和睛力最强，可导致心律失常，急、慢性心功尤能不全，扩张性心肌病甚至猝死，严重威胧胁人类健康［1］。柯萨奇B3病毒是典棍型的溶细胞病毒，目前尚无理想有效的药袄物。临床常用病毒唑作为治疗药物，但存在毒性较大，常出现白细胞减少、头痛、ろ不可逆贫血、血清胆红素升高、致畸等副窟作用。因此筛选、研制新的抗CVB3药审物就显得尤为重要。?近年来，病毒感染性疾病呈现快速上升的趋势，而且新》病毒种类不断出现，但长期以来抗病毒的榱药物发展缓慢。陆地生物药源越来越少，仲海洋生物为抗病毒新药的发现提供了广阔侔资源。第一个抗病毒海洋药物为阿糖胞苷鹆(Ara-C，Cytara-bine)，在1955年被美国FDA批准用于茑治疗人眼单纯疱疹病毒［2］。海洋药物没学的迅速发展，为药学研究开辟了广阔的黹前景，目前了解到红藻和褐藻具有很多抗查病毒、抗菌、增强抵抗力和提高免疫力等榍的生物活性作用［3］，但绿藻研究方面⒇比较少；孔石莼是海藻中蛋白质含量最高的一种藻体，本文初步研究了从孔石莼中窿提取蛋白多糖的方法，并研究了孔石莼蛋规白多糖抗病毒活性及其初步作用机制。目顷前海藻多糖抗病毒报道较多，但少见关于辙海藻糖蛋白或者蛋白多糖抗病毒的报道，本文从含蛋白质丰富的绿藻孔石莼中提取到具有抗病毒活性的蛋白多糖。1?材装料与仪器材料新鲜孔石莼：广东湛江南嫂海海域，-70℃保存。自来水反复冲洗兽，以除去泥沙和盐分等杂质，蒸馏水洗3蔻次，阴干表面的水分。试剂与仪器浓硫蜿酸，浓盐酸，氯化钡，硫酸铵，氯化钠，氯化钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，硫酸悫钾等，以上试剂均为广州化学试剂厂分析湎纯。DMEM培养基(Hyclone公盾司)；CO2培养箱(日本Sanyo公谋司