实验1-大肠杆菌培养及分离(2018).pptVIP

* * * * 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 3、分离 培养基灭菌 制作平板 扩大培养 划线分离 菌种保存 将LB液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌 将灭菌后冷却到60℃的LB固体培养基倒入灭菌过的培养皿中，制作平面培养基. 将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中，然后在37℃摇床中震荡培养12h。 用接种环取震荡培养后的菌液，并在固体培养基上划线，然后将划线后的培养皿倒置与37℃的恒温培养箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情况. 用接种环取单菌落，用划线法接种于斜面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h，再放入4℃的冰箱中保存 。 2、涂布分离法 1) 稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍） 用无菌吸管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。 2) 涂布 用无菌吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。再将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。 3) 培养 ： 将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 2.稀释涂布法: (1)系列稀释操作: 涂布器 * * * 1、能否观察到菌落?——如酸奶 2、培养一段时间后需要搅拌或振荡，目的？液体培养基用途？ 3、据图，能否判断呼吸类型？ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 实验1：大肠杆菌的培养和分离 1、微生物 病毒 细菌、蓝藻、放线菌 酵母菌、霉菌 原生动物 一、微生物的基础知识 (1)定义 (2)种类 (3)用途 单细胞原核，分支状的菌丝（基内~、气生~） 2、细菌——单细胞的原核生物 细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察 常见的三种细菌典型形态 球菌 杆菌 弧菌 结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色) 菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 酵母菌 放线菌 霉菌 菌落是鉴定菌种的重要依据。 成分 作用 主要来源 碳源 主要作能源物质 无机碳(CO2) 或有机碳(糖类) 氮源 合成含N类化合物 N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨 无机盐 调节渗透压等 水 生长因子 调节促生长 维生素，AA，碱基等 培养基的成分 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 培养基的类型 细菌扩大培养 固体培养基： 细菌的鉴定、分离纯化、计数等 培养基的类型 半固体培养基： 无动力 有动力(弥散) (是否运动) 动力检测，保种 培养基的类型 二、无菌技术 1.无菌操作的目的 防止培养基被其他微生物污染 (及避免操作者被微生物感染) 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 2.无菌操作的方法 消毒： 利用化学或物理方法，杀死大部分微生物的过程。 方法较为温和，如酒精 （注：消毒不能杀死芽孢） 灭菌： 以化学或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。 方法强烈 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 1、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法：用70%酒精进行皮肤消毒；氯气消毒水源 4、紫外线消毒（空气） (1)常用消毒的方法： (2)常用灭菌的方法： 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa（1kg/cm2）、121℃下维持15-30min. 3、无菌技术包括 (1)将实验器具和培养基：高压蒸汽灭菌 (2)接种