对单克隆抗体纯化工艺中复合配基介质精细纯化步骤高通量.PDFVIP

GE Healthcare 应用文献 28-9509-60 AB 高通量工艺开发 对单克隆抗体纯化工艺中复合配基 介质精细纯化步骤的高通量筛选和 优化 关键词：单克隆抗体，蛋白A，高通量筛选，工 单克隆抗体纯化的有效方法包含一个两步法工艺（图1），其 艺开发，优化，MabSelect SuRe™ PreDictor™， 中兼具疏水和离子交换相互作用的复合模式层析填料能够被 Capto™ adhere，复合配基介质 设计成单个产品，从而实现从单体形式中选择性去除抗体聚 体。MabSelect SuRe用于蛋白A的捕获步骤，而Capto adhere 摘要 用于选择性去除抗体聚体。 我们在一种高效的两步法中使用Capto adhere 和 MabSelect SuRe层析填料，显著降低了样品中IgG抗体聚 体的水平，获得了高的产量和纯度。此外，我们利用 PreDictor 96 孔板、 HiScreen™ 预装柱和 Design of Experiments （DoE）方法开发出一种筛选形式，用于最佳 实验条件的高效快速筛选。优化方案的应用让聚体水平 在单个步骤中从12.6% 降低至 0.5% ，而单体产量达 87%。宿主细胞蛋白（HCP）和配体泄漏降低至可忽略不 计。在大约4小时内筛选了总共192种条件（流穿和选择 图1. 经典的三步法（左）和基于MabSelect SuRe及Capto adhere 性洗脱实验），并在48小时内完成分析。本文所述的这种 的两步法替代工艺（右）。（CIEX = 阳离子交换层析；ALEX = 阴离 子交换层析；HIC = 疏水相互作用层析）。 高通量方法在工艺中的应用，使得工艺初始条件得以快 速地确定和后续优化。 复合模式填料的复杂性需要一个更加完善的工艺优化研 简介 究，以便充分利用这种技术的突出潜能。这需要开发出高 在单克隆抗体的纯化中，蛋白A （Protein A）亲和填料常 效快速的筛选方法，以确定最佳的工艺条件。 用于捕获步骤，因为它在单个层析步骤后可产生高的纯 度和产量。后续的下游处理可根据多种方案来开展，这 些方案包括了层析填料的不同组合（例如离子交换和疏 水相互作用层析）。 这是一套四个应用文献中的第二个，这一套应用文献致力 于单克隆抗体的工艺开发和生产中操作卓越性的开发。其 它的应用文献是： • 单克隆抗体纯化工艺中蛋白 A 捕获步骤的高通量筛选 和优化（28-9468-58） • 利用 HiScreen 和 AxiChrom™柱形式对下游单克隆抗 体纯化工艺的放大（28-9403-49） • 一种灵活的基于 ReadyToProcess™产品的抗体纯化工 艺（28-9403-48） 本应用文献描述了利用Capto adhere来开发和优化单克隆 抗体纯化工艺中的精细纯化步骤。在本研究的开始部分， 我们使用了预填充Capto adhere的PreDictor 96孔板来快速 筛选一个大的实验空间。从板研究中获得的有希望结果再 用HiScreen柱和DoE方法进一步优化，以便建立最终的工艺 条件。 图2. 初筛实验的Predictor板布局。 材料与方法 通过大小排阻层析（SEC ）在两个串联的Superdex™ 200 液体处理 5/150 GL柱中分析起始材料和流穿组分。每个样品在15分 所有实验都是用PreDictor板开展的，板上每个孔都含有6 μl 钟内分析。 Capto adhere。缓冲液是在自动的Tecan™ Freedom EVO-2 200 自动化液体系统中配制的，不过样品添加等步骤还是 流穿实验 手