虎杖不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用与酶动力学研究.PDFVIP

虎杖不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用与酶动力学研究 ＊ # a # b 李相成 ，刘小红，高 华 ，范美玲，刘 坤，王 威 （青岛大学医学院，山东青岛 266021） 中图分类号 R932 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2015）04-0494-03 DOI 10.6039/j.issn. 1001-0408.2015.04.20 摘 要 目的：研究虎杖不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用与酶动力学。方法：质量浓度分别为200、100、50μg/ml 的虎 杖总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物与120μl 黄嘌呤氧化酶（0.02U/ml ）作用于240μl 黄嘌呤溶 液（300μmol/L），采用高效液相色谱（HPLC）法测定黄嘌呤氧化酶-黄嘌呤反应体系尿酸生成量，计算抑制率。以40、20、10、5μg/ml 虎 杖乙酸乙酯提取物与100、80、60、40μg/ml 虎杖正丁醇提取物作用于240μl 黄嘌呤溶液，采用HPLC 法测定尿酸生成量。酶动力学 研究采用双倒数作图法确定有效溶剂提取物的抑制类型，采用二次作图法求药物对游离酶的抑制常数（K ）、药物对酶底物络合物 i 的抑制常数（K ）。结果：质量浓度为200、100、50μg/ml 时，虎杖乙酸乙酯、正丁醇提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制率均大于50％；虎 is 杖乙酸乙酯提取物的K 和K 分别为14.46 、61.82μg/ml ，虎杖正丁醇提取物的K 和K 分别为82.97、148.93μg/ml。结论：虎杖乙酸 i is i is 乙酯、正丁醇提取物对黄嘌呤氧化酶具有抑制作用，二者均为混合型抑制，对游离酶的抑制作用均强于对酶-底物复合物的抑制作 用。该结论为虎杖治疗痛风的新药开发和抑制黄嘌呤氧化酶作用有效成分研究提供了依据。 关键词 虎杖；痛风；黄嘌呤氧化酶；尿酸 Study on Inhibition and Enzyme Kinetics of Different Solvent Extractions From Polygonum cuspidatum on Xanthine Oxidase LI Xiang-cheng ，LIU Xiao-hong ，GAO Hua ，FAN Mei-ling ，LIU Kun ，WANG Wei （Medical College ，Qingdao University ，Shandong Qingdao 266021，China ） ABSTRACT OBJECTIVE ：To study the inhibition and Enzyme kinetics of different solvent extractions from Polygonum cuspida- tum on xanthine oxidase. METHODS ：Total extractions ，ethyl acetate extractions ，n-butanol extractions ，water extractions from P. cuspidatum with concentrations of 200，100，50 μg/ml+ 120μl xanthine oxidase （0.02 U/ml ）were respectively acted on 240 μl xanthine solution （300 μmol/L ）. HPLC was employed to test the formation amount of uric acid in the xanthine oxidase-xanthine re- action system and calcul