【医学ppt课件】冠心病的生化致病机理.ppt

冠心病的生化致病机理 吉林大学畜牧兽医学院 06级生物技术2班 李 俊 学号冠状动脉的图片 冠状动脉搭桥术 冠状动脉搭桥术，是让心脏搏出的血从动脉经过所架的血管桥，流向因引起狭窄或梗阻的冠状动脉远端而到达缺血的心肌，从而改善心肌的缺血、缺氧状态。这种心肌血运的重建术，叫作冠装动脉搭桥术。 冠状动脉搭桥术始于1964年，其方法是取自身的下肢静脉或内乳动脉作为搭桥的材料。在体外循环下，使心脏停跳，并在主动脉与冠状动脉病变的远端之间搭桥 冠心病的研究现状 然而，医学上的手术的疗法虽然是简单，实用，但是，给病人带来的痛苦也是巨大的。所以，未来的医学发展趋势必将是一种没有痛苦的温柔疗法。那么，探索冠心病的发病机制，并研制出合理的药物来治疗冠心病就显得十分的必要。以往该病的病因学研究多集中在老年性、遗传性、不良饮食和生活习惯等方面,近年来发现,人类冠状动脉粥样硬化灶病原学上类似于慢性炎症反应,认为微生物感染是冠心病(Coronary heart dis-ease, CHD)的致病机理之一,这一新概念的提出为CHD的预防和治疗提供了新的思路。 探针的敏感性和特异性的测定实验 探针敏感性实验: 将AR-39株全DNA进行10倍倍比稀释，分别制成10ng.1ng.100pg.10pg.1pg.100fg.10fg.的斑点膜,用探针杂交,其结果见下图: 探针特异性鉴定实验 1.Southern杂交。AR-39株全DNA 500ng经Pst酶切后转移到硝酸纤维素膜上,用DNA探针杂交。 2.DNA探针种特异性的鉴定。在Bio-dot吸印仪上制备沙眼衣原体TE55.L2/434./BU株,肺炎衣原体AR-39,VR1310株,鹦鹉热衣原体B11001株,Q热立克次体九里株,嗜肺军团菌LP6.LP8,肺炎链球菌,大肠杆菌,绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌全DNA斑点膜,进行探针的特异性杂交实验. CP的微生物学特征 CP是衣原体属中的一个新种,只有一个血清型,相对分子质量为9.8万的蛋白为其特异性抗原,其代表株为TWAR[2].CP在细胞中培养生长,经吉姆萨染色后,可出现衣原体独有的生活环,其细胞内的包涵体呈现圆形且致密,不含肝糖原,碘染色阴性。其自身不能产生三磷酸腺苷,要寄生在宿主的巨噬细胞、单核细胞或血管内皮细胞内,利用细胞的能量和营养进行繁殖。血清学上能用单克隆抗体鉴别CP的特异性。TWAR DNA的G+C含量为40%,这一数值提示其在衣原体属的范围内。已经证明CP不含有染色体以外的DNA(即不含质粒)。 肺炎衣原体的研究现状 Cpn作为再现病原体引起了广泛重视，并对其主要外膜蛋白（MOMP）展开了大量的研究。MOMP中有属、种和血清型特异性的抗原决定簇，从分子水平分析MOMP的结构与抗原表位的关系，对于免疫防御、免疫病理和免疫诊断均有重要意义。 主要外膜蛋白的基因特性 Montigiani等通过结合基因组学和蛋白质组学的方法 ，首次系统地定义了肺炎衣原体的外膜蛋白。 编码Cpn的 MOMP 的ompA基因的核苷酸序列的分析显示，它是含有1167个碱基的开放阅读框架，编码一个含366个氨基酸残基的蛋白和23个氨基酸残基的前导肽，在ompA基因的5’端游有一个核糖体的结合位点,两个中止子后紧随11个碱基形成茎环结构,这一Cpn序列与Ct血清型L2型的ompA基因有68%的同源性,种间比较发现,Cpn的可变区与其他衣原体只有极少的共同序列,但Cpn却含有C4和Cps所具有的7个高度保守的同源序列。 主要外膜蛋白的抗原表位分析 对Cpn的MOMP的免疫学特性一直存在争议。然而Wolf等的研究证实， MOMP是 Cpn感染期的免疫显性抗原。并提示初次抗体应答反应直接针对MOMP的构像表位。Klein等仔细比对了许多的衣原体表面重组蛋白的种属特异性。 相对分子质量为15000的CrpA，9000的OMP3，6000的OMP2，以及MOMP的4个VD构像的重组蛋白在E.coli 中大量表达,经纯化及Western印记检测后,分别用抗Cpn及抗Ct的病人血清通过微量免疫荧光法检测分析重组蛋白的免役反应性。 主要外膜蛋白的抗原表位分析 结果未发现可以识别Cpn的PorB和OMP3蛋白的血清抗体；抗Cpn的血清可以交叉识别Ct的OMP2，抗Ct的血清可以交叉识别 Cpn的 CrpA，提示有些衣原体的表面蛋白有共同的抗原决定簇。与此对应， Cpn的VD2和VD3重组蛋白只能被Cpn抗体阳性血清识别。而不被抗Ct的血清识别。 提示，