细胞的鉴定PPT.pptVIP

第12章 细胞的鉴定 一、鉴定的需求 一个细胞系，从能够分离组织到得到一种新的细胞系开始，就应该具有其起源等的详细资料 随着通过细胞库和私人联系广泛传播到远离其起源的各研究室及商业公司，细胞培养中关于起源的问题也变得尤其重要 细胞的真实性需要在获得细胞系时就得到鉴定，并且要经常鉴定 应该特别注意细胞系之间发生交叉污染的可能性： 在20世纪60年代美国使用的大多数连续细胞系都与Hela细胞系发生了交叉污染，30年后这些细胞仍在使用，说明许多人仍未意识或不愿接受所使用的细胞系是不真实的这一事实 在不知情的情况下使用已被Hela细胞污染的细胞系仍是一个重要问题，而且任何一种生长旺盛的细胞系都可以超过另一种生长较慢的细胞系 细胞系鉴定常用的方法 标准 方法 参考文献 核型 同功酶分析 细胞表面抗原 细胞骨架 DNA指纹 染色体铺展显带 琼脂凝胶电泳 免疫组织化学 特异角蛋白抗体的免疫组织化学 限制酶酶切；PAGE; 卫星DNA探针 Rorhfels and Siminovitch,1958; Rooney and Czepulkowski.1986 Hay,1992 Hay,1992; Burchell et al. 1983,1987 Lane, 1982; Moll et al. 1982 Lane, 1982; Jeffreys et al. 1985 鉴定要求 鉴定细胞系主要有6个方面的要求： ①确定无细胞系间的交叉污染。 ②确定其物种来源。 ③与来源组织的关系，包括下列特征： a)确定细胞所属种系； b)在该种系中细胞所处的阶段(干细胞、前提细胞、分化阶段)。 ④确定细胞系是否发生转化： a)该细胞系是有限细胞系还是连续细胞系； b)细胞系是否表达恶性特征。 ⑤是否有迹象表明细胞系有遗传不稳定倾向和表型多样性的倾向。 ⑥确定一组起源相同的细胞系中的特定细胞系，以及挑选出的细胞株或杂交细胞系，都要提供证明该种细胞系或细胞株的独特特征。 二、保存记录和身世 一种新的细胞系，不论是从原代培养衍生或是从已有的细胞系衍生，很难估计它未来的价值。通常要经过一段时间的应用、传播后，才能真正体现其重要性。 从组织分离或得到一种新的细胞系开始，充分记录有关细胞系的起源和处理的详细资料，至关重要。 随着细胞系通过细胞库和私人联系广泛传播已远离其起源的各研究室及商业公司，细胞培养工作中细胞系起源方面的问题也变得尤其重要。 特别是当研究需要使用成分明确的细胞时，细胞的真实性即成为关键。 在获得细胞时就应鉴定其真实性，并在使用观察中定期鉴定，并及时补充到已有的“身世”记录中。 1. 种属鉴定 在实验中经常联合使用两种方法： 染色体分析是区分物种的最佳方法。 同功酶电泳也是一种较好的诊断检测方法，且比染色体分析快。 采用染色体染色技术——使用特异性分子探针组合与某条染色单体杂交，可以识别特定的某条配对染色体且具有种属特异性。 目前仅有几个物种的探针可供使用，多为人类或小鼠的。 是一种区分有潜在交叉污染及物种间杂交的小鼠染色体和人类染色体的很好的办法。 染色体显带技术同样可以区分小鼠和人类染色体。 2. 谱系或组织标记 细胞表面抗原 对造血细胞的分选特别有用； 一些特异抗原可以区分上皮与基质，神经外胚层来源的细胞和其他胚层来源的细胞。 中间纤维蛋白： 是应用最广的细胞谱系的组织标记； 神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)可标记星形细胞； 结蛋白可标记上皮和间皮细胞； 波形蛋白，通常在体内受限于中胚层来源的细胞，但在体外也可见于其他类型的细胞。 分化的产物和功能 特定细胞类型标记物：血红蛋白标记红细胞，肌球蛋白或原肌球蛋白标记肌细胞，黑色素标记黑色素细胞，血清蛋白标记肝细胞。依赖于分化表型的完全表达。 无机离子的运输以及相应的水分子的转运是某些上皮细胞的特性。单层生长的上皮可产生隆凸，在单层细胞中呈半囊泡性，这些隆凸可以在吸收性和分泌型的上皮细 胞中发现，并且在体外可表现其他特殊功能，包括肌肉收缩和神经细胞膜的去极化 见图示 酶类，三种可用的参数： 基本水平(没有诱导物或阻抑物的情况下)； 与诱导物和阻抑物的反应； 同功酶多形态：肌酸激酶BB同功酶属于神经特异的烯醇化酶，是神经原和神经内分泌细胞所特有的；乳酸脱氢酶存在于大多数组织中，能由地塞米松诱导出高水平的酪氨酸转化酶，一般认为是肝细胞所特有。 见表：酶的标记物 细胞谱系的忠实性 尽管上述许多标记可作为细胞谱系的标记物，但是组织或细胞类型标记物应该更恰当一些，因为与胚胎起源相比，这些标记更代表细胞功能。 尽管间皮和肾上皮细胞起源于中胚层，细胞角蛋白仍可能存在于这两种细胞组织中。 神经特