2011生化与分子生物学实用技术课幻灯PPT.ppt

引物a(划线部分为HindⅢ酶切位点)： 5′-GCGAAGCTTCCATGAACGACGTAGCCATTGT-3′ 引物b(划线部分为BamHI 酶切位点)： 5′-ATTGGATCCTCAGGCTGTGCCACTGGCTGAG-3′ PCR产物末端限制酶切位点的切断情况 10×PCR反应缓冲液 5.0 ?l dNTP mix(2mmol/L) 4.0 ?l Ex Taq DNA聚合酶(5U/?l ) 0.25 ?l 引物 a (10pmol/?l ) 2.0 ?l 引物 b (10pmol/?l ) 2.0 ?l pCIS2-Akt1 5ng 加水至 50 ?l 应用TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶，反应体系为50 ?l 94℃预变性1min，然后按照94℃ 30sec，63℃ 45sec，72℃ 1min，进行29个循环，最后72℃延伸10min 。