玉米致死性坏死病发病典型症状和检测方法.PDF

玉米致死性坏死病发病典型症状及检测方法 1. 玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)侵染玉米典型症状 感病玉米植株叶片具有浅绿色条纹或者从平行斑点发展成明脉、褪绿、斑驳、 花叶和严重的植株矮化等症状。 图3 玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)侵染玉米典型症状 ( 引自College of tropical agriculture and human resources, Maize chlorotic mottle, Plant Disease, 2011) 。1-3：感病植株，4：健康植株。 2. 甘蔗花叶病毒(SCMV)侵染玉米典型症状 受甘蔗花叶病毒(SCMV)侵染的玉米幼叶表现花叶、褪绿条纹、明脉和矮化 症状；成株感病叶片黄化、花叶和褪绿，严重发病的玉米植株叶片干枯、坏死。 图4 甘蔗花叶病毒(SCMV)侵染玉米典型症状 (1-3 引自/photos/cimmyt/4927565808/ ；4 引自陈炯等编 著《植物病毒种类分子鉴定》) 3. 玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)和甘蔗花叶病毒(SCMV)复合侵染导致玉米致死性 坏死病典型症状 (1) 苗期 在苗期玉米植株叶片表现花叶、褪绿、明脉症状，严重植株叶片干枯、坏死。 图5 MCMV 和SCMV 复合侵染导致玉米致死性坏死病苗期典型症状 (2) 抽穗前期 登高俯视玉米发病田块可观察到植株稍部叶片黄化、叶尖枯死；发病严重植 株稍部叶片干枯、坏死；近距离观察发病叶片可看到花叶、褪绿、斑驳和黄化等 症状；后期叶片干枯、坏死。 图6 MCMV 和SCMV 复合侵染导致玉米致死性坏死病抽穗前发病典型症状 (3) 成熟期 感病玉米果穗干瘪坏死，果粒稀疏。 图7 MCMV 和SCMV 复合侵染导致玉米致死性坏死病典型症状 图8 MCMV 和SCMV 复合侵染导致玉米粒缺失典型症状 MCMV 和SCMV RT-PCR 检测方法 一、植物总RNA 抽提 可采用两种方法从病毒侵染的叶片中提取植物总RNA(根据实际情况选用任 意一种方法即可) ，所用试剂器皿均需作无RNA 酶处理，抽提步骤如下： 1. Trizol 法提取植物总RNA Invitrogen Trizol(INVITROGEN) 提取植物总 RNA ，具体方法参照 INVITROGEN 产品说明: (1) 将样品在液氮中研磨成粉末，然后加入1 ml Trizol/100 mg 组织（以下以 1 ml Trizol 试剂标准）。 (2) 研磨后转入无RNA 酶1.5 ml Eppendorf 管中，剧烈振荡混匀，室温放置 5 min。 4 ℃，13，000 rpm 离心5 min。 (3) 取上清，加入1/5 体积氯仿(CCl ) ，用力摇15 s，室温放置2-3 min。4 ℃ 4 13, 000 rpm 离心10 min。底层为氯仿相，中层为蛋白相，上层是含RNA 的无色 水相。将上清转入一新的离心管（注意不要吸入蛋白层），加入0.5 ml 氯仿于上 清，振荡混匀，室温放置2-3 min。4 ℃ 13, 000 rpm 离心10 min。 (4) 将上清转入一新的离心管，加入与上清等体积的异丙醇，颠倒混匀，室 温放置10 min。4 ℃ 13, 000 rpm 离心10 min，去上清。加入1 ml 预冷的75% 乙 醇（用DEPC 处理水配制），洗涤沉淀。4 ℃ 12, 000rpm 离心5 min。去上清，倒 扣于空气中干燥10 min，用DEPC 处理水溶解。 (5) RNA 质量检测 RNA 样品OD 值检测：取2 μl RNA 溶液加入到998 μl DEPC 处理水中，用 紫外分光光度计测定230 nm 、260 nm 和280 nm 的OD 值。RNA 浓度＝OD 260× 核酸稀释倍数×40/1000(μg/μl)。去除蛋白指标：OD260/OD280≥1.8；去除盐分指 标：OD260/OD230≥2.0 。利用Nanodrop 2000 可检测RNA 样品的浓度和纯度， 用2μL RNase free 水或TE 溶液清洗探头并作为空白对照(此处应选溶解RNA 时 选用的溶液来清洗和用作对照) 。让后取待