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3730xl测序原理及特点;3730xl测序仪的原理 双脱氧链终止法测序原理 3730xl测序仪的构造 3730xl测序仪的特点 测序基本流程 3730xl测序仪的应用 文库类型及特点 ;Sanger测序法的原理; 1977年，英国人Fred Sanger 发现，如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会产生一系列末端终止的DNA链，并能通过电泳按长度分辨。 不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。 由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。;DNA测序的双脱氧链末端合成终止法. Sanger法测序的原理： 用DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止。 每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。 由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止，终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。 它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段进行检测。;;原理:在一端引物上标记特定的荧光,通过PCR产物长度大小，检测基因型. 内标选择: 1、荧光.(引物上物加的荧光的类型) Liz500：FAM(蓝色), VIC (绿色), NED (红色), HEX(黑色) Liz120；ROX500(FAM,JOE,NED,PET) 2、目的片断的大小. Liz500(35-500bp), Liz120(15-120bp);;模板DNA;ddNTP被加到正在合成的链上，由于它的3’-OH已被氧化，下一个dNTP的5’-磷酸基团不能与之形成磷酸二酯键，使合成终止。 在引物等延伸反应过程中，ddNTP在不同位置掺入，产生了一系列不同长度的新的DNA片段。;3730xl Sequence Map;测序反应与PCR的比较;3730xl测序仪的构造;遗传分析仪系统组成;照明灯开关;泵胶块; 加热炉内仓;96道毛细管同时检测;;3730XL测序原理;3730xl测序仪的特点;1 电进样及电泳;2 荧光激发和检测;;激发：Dual Side Illumination双束激光两侧同时激发：灵敏度+均匀性+超速测序;检测：光栅+低温CCD同步成像;CCD检测器把检测到的荧光信号转换为电信号，并把它传送给安装了Data Collection（简称DC）;Fully Integrated System;DNA测序基本流程;;测序的应用;Long read with BigDye? Terminator v3.1: 1010bp;;杂合子检测：发现新突变位点;再测序;基因分析技术在生物、医学、农牧业领域的应用;STR遗传标记基因分型;CNV遗传标记在MLPA反应的结果;原理：单碱基延伸,单碱基测序.利用延伸引物对PCR产物进行单个碱基的延伸,并引入尾部的荧光.其荧光的颜色及其荧光出现的位置进行区分其基因型 SnapSHot技术优点：可以研究样本量少,snp位点多,位点间物理距离较远的SNP检测.;;基因文库（Gene Library）;基因组文库 含有某种生物全部遗传信息的重组DNA分子的克隆总和;基因组文库常用的载体及特点;各种克隆载体的比较;;cDNA 文库 直接以完整的mRNA为模板反转录成的全长cDNA分子与克隆载体连接后，转导到寄主细胞，经复制形成的在寄主细胞中保存的许多克隆 ;分类 质粒cDNA文库 噬菌体cDNA文库 表达文库 非表达文库 未处理cDNA文库 均一化cDNA文库 差减cDNA文库;普通cDNA文库应用领域;;建立cDNA文库的特殊方法;SMART技术： Switch Mechanism At the 5’end of RNA Templates 模板跳转转移机制 利用逆转录酶的末端转移酶活性，经巧妙设计而成为有力武器。;;