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第三章 细胞培养技术 细胞培养 细胞培养的操作方式 3.1 细胞培养 概念：是指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌、适当条件下使其生长繁殖的一种技术。 依培养对象分类： 植物细胞培养：原生质体培养、花药培养、愈伤组织培养、组织培养、藻类细胞培养等。 动物细胞培养：精子与卵子培养、受精卵培养、胚胎培养、组织与器官培养。 培养方法： 悬浮培养、固定化培养、原代培养、传代培养、分批培养、流加培养、半连续培养、连续培养、灌流培养等。 细胞培养的影响因素： 营养、温度、pH、渗透压、溶解氧、光照、剪切力等。 3.2 细胞培养的操作方式 分批式培养 添加式培养 半连续式培养 连续式培养 灌流式培养 根据细胞培养时营养成分添加以及培养液与细胞收集方式的不同，细胞培养可分为如下5种操作方式。 3.2.1 分批式培养 概念：是指细胞和培养基一次性加入到培养容器或生物反应器内进行培养，在培养过程中培养液体积不变，不添加营养成分，待细胞增长和产物积累到适当的时间，一次性收获细胞、产物和培养液的培养方法。 细胞生长特点：一般分为5个阶段即延迟期、指数生长期、减速期、平台期和衰退期。 3.2.1 分批式培养 分批培养的特点： 操作简单，培养周期短。培养系统属于封闭式，培养过程中与外部环境没有物料交换，染菌和细胞变异概率低。 除了控制温度、pH和通气量或搅拌速度外，不进行其他控制。 直观反映细胞生长代谢过程。因为培养期间不添加任何营养成分，细胞生长代谢是在一个相对固定的环境中，适合研究营养消耗、细胞生长、代谢产物积累规律。 可直接放大。由于培养过程工艺简单，对设备和控制的要求较低，规模放大比较容易。 存在不能控制底物浓度、细胞易老化、生长周期短、效率低等不足。 3.2.2 添加式培养 添加式培养的两种类型： 单一补料：开始培养后，连续补加浓缩的营养物质，直到培养液体积达到生物反应器的最大操作容积。 反复补料：开始培养后，每隔一段时间按一定比例放出一部分培养液，使培养液体积始终不超过反应器的最大操作容积。