人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序(共40张PPT)PPT.ppt

1.2 基因工程的基本操作程序 知识点一：1.原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落) ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 2.真核细胞的基因结构 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点等。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 知识点二.基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 一、目的基因的获取 (一)目的基因主要是编码蛋白质的结构基因 （二）获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 1、从基因文库中直接获取 （1）基因文库： （2）基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因 如：cDNA文库 （3）基因文库的目的 为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 （4）基因文库的构建方法 A、直接分离法(鸟枪法) 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 B、反转录法：cDNA的合成流程图解 IMN 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 过程 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补结合） 适温延伸（在Taq酶的作用下合 成与模板互补的DNA双链） 重复循环 预变性（增加DNA变性的概率） 2、利用PCR技术扩增目的基因 具体过程 ②原理：__________ ③方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） DNA复制 指数 2n 小结PCR技术 ①概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项 在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术 D、四种脱氧核苷酸(dNTP) A、一对引物：一对寡核苷酸序列：与目的 基因的起始段互补 E、热稳定DNA聚合酶(Taq酶） C、模板DNA( 需含有目的基因 ) G、Mg2+(激活剂) ④条件： F、缓冲溶液 B、一段已知目的基因的核苷酸序列，以 便根据这一序列合成引物 ⑤过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 ⑥结果： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 PCR技术扩增与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚